大鼠颞下颌关节软骨细胞

大鼠颞下颌关节软骨细胞

从Sprague-Dawley大鼠长骨骨膜或骨组织经胶原酶 I/II 联合消化获取骨细胞，经差速贴壁纯化后接种于玻连蛋白包被的培养皿中，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过免疫荧光检测骨细胞标志物 E11/gp38、Piezo1、SOST（硬化蛋白）及 DMP1 表达，并采用共培养体系与破骨细胞前体细胞共培养验证成骨-破骨偶联信号传导功能。

产品名称：大鼠颞下颌关节软骨细胞

英文名称： Rat Temporomandibular Joint Chondrocytes

组织来源： 颞下颌关节软骨组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠颞下颌关节软骨细胞采用胶原酶联合中性蛋白酶消化制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠颞下颌关节软骨细胞，P0代经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠颞下颌关节软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每3-4天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠颞下颌关节软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微解剖器械、培养皿、离心管、200 目筛网

试剂：预冷 PBS、DMEM 高糖完全培养基、Ⅱ 型胶原酶、双抗

二、取材与预处理

分离大鼠双侧颞下颌关节，暴露关节盘与髁突透明软骨。

显微镊小心刮取纯白色软骨组织，PBS 漂洗无血污，剪碎至 1mm³。

三、细胞分离与消化

Ⅱ 型胶原酶 37℃摇床消化 4~6h，充分分解软骨基质。

完全培养基终止消化，滤网过滤残渣，离心收集细胞。

PBS 洗涤沉淀 2 次，去除胶原酶残留。

四、纯化与接种培养

培养基重悬细胞接种培养瓶，37℃静置培养。

48h 换液去除未贴壁细胞，每 3 天换液。

细胞长满后低比例传代，Ⅱ 型胶原染色鉴定软骨细胞。

1.取材时需仔细去除血管或器官表面的脂肪组织和结缔组织，仅保留平滑肌层，操作时间控制在20分钟以内。

2.培养器皿无需特殊包被，普通培养板即可支持平滑肌细胞贴壁，但用纤连蛋白包被可增强细胞贴附。

3.长期培养中需定期检测细胞标志物表达，确保细胞身份和纯度不受影响。

4.培养基中添加20%胎牛血清和10ng/ml血小板衍生生长因子(PDGF)可显著促进平滑肌细胞增殖。

5.换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，注意观察细胞形态变化，收缩型细胞呈梭形峰谷状排列。