产品名称 | 大鼠脑微血管周细胞 | 组织来源 | 大脑皮质组织 |
英文名称 | Rat Brain Microvascular Pericytes | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3329 |
方法简介 实验室分离的大鼠脑微血管周细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠脑微血管周细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 大鼠脑微血管周细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠脑微血管周细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取目标组织微血管片段
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、ECM基质胶、FBS、PBS
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷PBS冲洗去除血液
仔细分离微血管片段，剪碎后加入II型胶原酶37度消化45-60分钟
消化液经70um和40um滤网过滤，300g离心10分钟收集细胞
采用免疫磁珠分选(抗PDGFR-beta抗体)富集周细胞
原代培养要点
周细胞使用DMEM/F12+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养
接种于纤维连接蛋白包被的培养皿中，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞呈梭形贴壁生长
常见问题优化
周细胞得率低：优化微血管分离方法，提高微血管片段纯度
内皮细胞污染：采用PDGFR-beta磁珠分选提高纯度
细胞表型维持：控制传代次数，使用低浓度血清培养
大鼠肾母细胞瘤蛋白1(WT1)elisa试剂盒 | CTX大鼠脑星形胶质细胞 |
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员5b(WNT5b)elisa试剂盒 | 人子宫瘤细胞 |
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员3a(WNT3a)elisa试剂盒 | 人乳腺成纤维细胞 |
大鼠无翅型MMTV整合位点家族成员10B(WNT10B)elisa试剂盒 | MOLT-4 (人急性淋巴母细胞白血病细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠6酮前列腺素F12(6-keto-PGF12)elisa试剂盒 | 人卵巢癌细胞SW626(STR鉴定正确) |
大鼠6酮前列腺素FLa(6-keto-PGFLa)elisa试剂盒 | 大鼠肺微血管内皮细胞 |
猪玉米赤霉烯酮（Zearalenone）elisa试剂盒 | 大鼠原代骨髓巨噬细胞 |
SK-NEP-1人肾母瘤细胞专用培养基 | C19orf44基因过表达细胞株 |
RD人横纹肌肉瘤细胞专用培养基 | ABI3基因过表达细胞株 |
兔原代股动脉内皮细胞专用培养基 | IQCA1L基因过表达细胞株 |
猪原代前列腺成纤维细胞专用培养基 | KCNQ4基因过表达细胞株 |
人原代视网膜色素上皮细胞专用培养基 | DNAJB14基因过表达细胞株 |
大鼠脑微血管周细胞SK-LU-1细胞专用培养基 | ABHD15基因过表达细胞株 |
兔原代支气管上皮细胞专用培养基 | CPNE5基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
滤网套装、离心管、培养瓶、梯度离心试剂
试剂：PBS、周细胞专用完全培养基、胶原酶消化液
二、取材与预处理
同脑微血管内皮取材步骤，收集大脑皮层微血管片段。
漂洗微血管去除游离红细胞。
三、细胞分离与消化
微血管组织消化解离，梯度离心分层，下层沉淀主要为周细胞。
培养基中和消化，离心收集细胞沉淀，洗涤去除酶杂质。
四、纯化与接种培养
直接接种培养瓶，周细胞贴壁速度快于内皮细胞，差速弃除内皮上清。
每 3 天更换培养基，细胞呈星状、梭形生长。
PDGFRβ 免疫荧光鉴定周细胞，汇合后传代。
