大鼠脑微血管内皮细胞

大鼠脑微血管内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离Sprague-Dawley大鼠脑微血管内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：大鼠脑微血管内皮细胞

英文名称： Rat Brain Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 大脑皮质组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠脑微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠脑微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠脑微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代；不建议多次传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠脑微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

精细显微镊、玻璃匀浆器、400 目 + 800 目双层滤网、明胶包被培养瓶

试剂：预冷 PBS、DMEM/F12 内皮专用培养基、胶原酶 + DNaseⅠ 消化液、BSA 梯度液

二、取材与预处理

取新生大鼠大脑，剔除小脑、脑干与脑膜，仅留大脑皮层。

PBS 漂洗脑组织，剪碎后轻柔玻璃匀浆，破碎大血管保留微血管片段。

三、细胞分离与消化

匀浆组织经双层滤网过滤，截留微血管团块，收集滤网上微血管。

加入胶原酶 DNase 混合消化液 37℃消化 45min，间断吹打。

血清终止消化，BSA 密度梯度离心分离微血管内皮细胞。

四、纯化与接种培养

吸取中间细胞层，PBS 洗涤后接种明胶包被培养瓶。

差速贴壁去除周细胞、成纤维细胞，每 2 天换液。

细胞形成典型铺路石结构后传代，CD31、ZO-1 鉴定血脑屏障内皮纯度。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。