大鼠脑膜成纤维细胞

大鼠脑膜成纤维细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的脑膜成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：大鼠脑膜成纤维细胞

英文名称： Rat Meningeal Fibroblasts

组织来源： 脑膜组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠脑膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠脑膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠脑膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右；1-2代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠脑膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

解剖器械、培养皿、离心管、细胞筛

试剂：PBS、DMEM 完全培养基、0.25% 胰酶、双抗

二、取材与预处理

剪开大鼠颅骨，小心剥离大脑表面硬脑膜、软脑膜完整膜组织。

PBS 漂洗脑膜组织，去除粘连脑组织与血凝块，剪碎脑膜。

三、细胞分离与消化

胰酶 37℃消化 20min，吹打解离组织块。

培养基终止消化，滤网过滤杂质，离心收集细胞。

PBS 洗涤沉淀两次，去除消化液。

四、纯化与接种培养

完全培养基重悬接种培养瓶，差速贴壁纯化成纤维细胞。

48h 换液，去除未贴壁神经类杂细胞。

细胞铺满瓶底即可常规传代培养。

1.血管组织取材后需立即置于冰预冷的M199培养基中运输，尽快去除外膜结缔组织和脂肪组织。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.在基础培养基中补充20%胎牛血清、10ng/ml EGF和2ug/ml肝素钠，可维持内皮细胞表型稳定。

5.培养期间每48小时换液一次，观察细胞融合情况，融合度达90%以上时进行传代处理。