大鼠脑静脉血管内皮细胞

大鼠脑静脉血管内皮细胞

从Sprague-Dawley大鼠脑静脉血管内皮细胞组织标本经胶原酶-弹性蛋白酶联合消化获取单细胞悬液，通过 Percoll 密度梯度离心纯化内皮细胞组分，接种于纤维连接蛋白预包被的培养皿中，使用内皮基础培养基 supplemented with 多种生长因子（VEGF、FGF-2、IGF-1 及 Ascorbic acid）维持培养；通过免疫荧光染色显示 CD31 膜染色阳性、vWF 胞质颗粒状表达，并结合乙酰化 LDL 荧光摄取实验和内皮管腔形成 assay 综合鉴定。

产品名称：大鼠脑静脉血管内皮细胞

英文名称： Rat Cerebral Venous Endothelial Cells

组织来源： 脑静脉组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠脑静脉血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠脑静脉血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠脑静脉血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠脑静脉血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微解剖套装、明胶包被培养器皿、细胞筛

试剂：预冷 PBS、内皮细胞完全培养基、Ⅰ 型胶原酶、终止血清

二、取材与预处理

分离大脑浅表静脉血管，冲洗管腔血液，去除血管外多余结缔组织。

无菌 PBS 冰浴清洗 3 遍，纵向剪开静脉血管。

三、细胞分离与消化

胶原酶浸泡消化血管内壁 18~25min，刮取内皮细胞。

培养基终止消化，筛网过滤大块组织，离心收集细胞。

PBS 重悬离心洗涤，去除红细胞污染。

四、纯化与接种培养

细胞悬液接种包被培养瓶，差速贴壁剔除平滑肌杂细胞。

隔天更换内皮培养基，观察典型内皮铺路石形态。

细胞汇合后分瓶传代培养。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.培养皿经常规消毒处理即可使用，成纤维细胞对培养表面要求不高，贴壁速度快。

3.长期培养中需定期检测细胞标志物表达，确保细胞身份和纯度不受影响。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。