大鼠脑成纤维细胞

大鼠脑成纤维细胞

从Sprague-Dawley大鼠脑成纤维细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：大鼠脑成纤维细胞

英文名称： Rat Brain Fibroblasts

组织来源： 大脑皮质组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠脑成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠脑成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠脑成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠脑成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

器械：解剖剪、弯镊、细胞筛、离心管、T25 培养瓶

试剂：预冷无菌 PBS、DMEM 高糖完全培养基（10% FBS + 双抗）、0.25% 胰蛋白酶

超净台提前紫外消毒 30min，器械高温灭菌。

二、取材与预处理

乳鼠脱颈处死，头部酒精消毒，剪开颅骨完整取出大脑脑组织。

预冷 PBS 漂洗脑组织，仔细剔除脑膜、血管血块，仅保留脑实质。

三、细胞分离与消化

脑组织充分剪碎至糊状，加入胰酶 37℃消化 25min，每隔 8min 吹打混匀。

加入完全培养基终止消化，200 目筛网过滤组织碎块。

滤液 1000rpm 离心 5min，PBS 洗涤细胞沉淀 2 次。

四、纯化与接种培养

完全培养基重悬细胞沉淀，直接接种培养瓶。

差速贴壁 30min，贴壁牢固的即为脑成纤维细胞，倒掉含神经细胞上清。

常规培养，2~3 天换液，细胞铺满瓶底即可常规传代扩增。

1.手术获取组织后需立即在显微镜下剥离平滑肌层，避免成纤维细胞等杂细胞过度污染。

2.常规培养皿经PBS冲洗后即可使用，平滑肌细胞具有较强的自主贴壁能力。

3.细胞生长速率受血清批次影响较大，建议实验前对不同批次血清进行预实验筛选。

4.培养基中补充10%FBS和0.1uM苯肾上腺素可维持平滑肌细胞收缩表型相关蛋白表达。

5.换液时弃去旧培养基后用PBS轻柔洗涤一次再加入新鲜培养基，可减少代谢废物积累。