大鼠毛囊细胞

大鼠毛囊细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从Sprague-Dawley大鼠毛囊细胞组织获取目标细胞，经密度梯度离心和预培养纯化后接种于特异性基质包被培养皿中，采用优化培养基体系（含 10% FBS 及针对性添加剂）维持培养；通过免疫细胞化学、流式细胞术及分子生物学方法综合鉴定细胞类型，并评估其体外增殖与功能特性。

产品名称：大鼠毛囊细胞

英文名称： Rat Hair Follicle Cells

组织来源： 胡须毛囊组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠毛囊细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠毛囊细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠毛囊细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠毛囊细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

器械：精细显微镊、眼科剪、六孔板、无菌培养皿

试剂：预冷 PBS、毛囊专用无血清培养基、0.25% 胰酶、中性蛋白酶 DispaseⅡ

预处理：培养板用多聚赖氨酸包被备用

二、取材与预处理

大鼠背部剃毛，75% 酒精消毒皮肤，剪下背部皮肤组织。

PBS 漂洗皮肤，修剪多余皮下脂肪，皮肤表皮面朝上平铺，DispaseⅡ4℃过夜消化表皮真皮分离。

三、细胞分离与消化

分离真皮层，显微镊子逐个拔取完整毛囊毛球结构，收集毛囊置于 PBS 中。

毛囊组织剪碎，胰酶 37℃消化 15~20min，血清终止消化。

轻柔吹打制成单细胞悬液，1500rpm 离心 6min 收集细胞。

四、纯化与接种培养

弃上清，专用毛囊培养基重悬细胞，接种至包被六孔板。

24h 后首次换液去除未贴壁死细胞，每 3 天更换培养基。

细胞增殖汇合后低浓度胰酶轻柔传代，避免毛囊干细胞分化。

1.血管组织取材后需立即置于冰预冷的M199培养基中运输，尽快去除外膜结缔组织和脂肪组织。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.在基础培养基中补充20%胎牛血清、10ng/ml EGF和2ug/ml肝素钠，可维持内皮细胞表型稳定。

5.实验选用SD大鼠或Wistar大鼠，年龄和体重需符合实验标准要求。 细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。