大鼠卵泡膜细胞

方法简介  实验室分离的大鼠卵泡膜细胞采用先机械分离后胶原酶消化结合Percoll密度梯度离心法、并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠卵泡膜细胞经3β-HSD免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠卵泡膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠卵泡膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前置准备

实验动物：SD大鼠，取目标组织

试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、相应专用培养基组分

分离纯化步骤

取实验动物目标组织，用预冷PBS冲洗去除血液和杂质

剪碎组织后采用胶原酶消化法(37度、1-2小时)分散细胞

过滤后300g离心8-10分钟收集细胞

根据细胞类型采用适当方法进一步纯化(密度梯度离心/免疫磁珠分选/差速贴壁)

原代培养要点

将纯化后的细胞接种于适当包被的培养皿中

使用含10%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养

每2-3天换液一次，根据细胞生长特性调整培养条件

常见问题优化

细胞得率低：根据组织特性优化消化时间和酶浓度

细胞纯度不高：采用多种纯化方法联合使用提高纯度

细胞表型维持：控制传代次数，必要时采用特殊培养基或包被基质

一、实验前准备

显微操作器械、离心管、细胞筛；DMEM、胶原酶 Ⅰ、胰酶、PBS、胎牛血清。

所有耗材高压灭菌备用。

二、取材与预处理

取出大鼠卵巢，PBS 漂洗后针头穿刺卵泡，剥离卵泡外层卵泡膜组织。

剔除内层颗粒细胞残留，仅保留卵泡膜间质组织，PBS 清洗干净。

将组织充分剪碎至细小颗粒。

三、细胞分离与消化

碎组织加入 Ⅰ 型胶原酶 37℃水浴消化 50min，间断吹打。

胰酶辅助消化 10min，血清终止消化过程。

静置后吸取上层单细胞悬液。

四、纯化与接种培养

滤网去除组织残渣，离心洗涤细胞沉淀 2 次。

完全培养基重悬细胞接种培养瓶。

差速贴壁纯化，4h 更换培养基去除杂细胞，后续常规培养。