大鼠卵巢上皮细胞

大鼠卵巢上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从Sprague-Dawley大鼠靶组织中分离卵巢上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：大鼠卵巢上皮细胞

英文名称： Rat Ovarian Epithelial Cells

组织来源： 卵巢组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠卵巢上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠卵巢上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠卵巢上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠卵巢上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微器械、细胞筛；上皮培养基、Dispase 酶、胰酶、无菌 PBS。

实验环境提前紫外灭菌。

二、取材与预处理

无菌分离大鼠卵巢，彻底剥离附着脂肪与韧带组织。

PBS 反复冲洗卵巢包膜表面血迹，剪取卵巢最外层包膜上皮组织。

三、细胞分离与消化

卵巢包膜组织剪碎，DispaseⅡ 低温消化过夜，分离上皮层。

次日胰酶消化解离单细胞，培养基中和消化。

吹打混匀制备细胞悬液。

四、纯化与接种培养

过滤离心收集细胞，上皮专用培养基重悬接种。

12h 后更换培养液，去除未贴壁杂细胞。

恒温培养，隔天换液维持细胞生长。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。