大鼠角膜上皮细胞

大鼠角膜上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从Sprague-Dawley大鼠靶组织中分离角膜上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：大鼠角膜上皮细胞

英文名称： Rat Corneal Epithelial Cells

组织来源： 眼角膜组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠角膜上皮细胞采用混合胶原酶消化结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠角膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠角膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

器械：显微手术器械、角膜剪、细胞筛、移液管、六孔板。

试剂：角质细胞专用无血清培养基、PBS、0.25% 胰酶、DispaseⅡ 中性蛋白酶、双抗。

环境：超净台紫外消毒，所有耗材提前高压灭菌烘干。

二、取材与预处理

大鼠麻醉处死后摘取眼球，含双抗 PBS 反复冲洗眼球 3 遍。

沿角膜缘环形剪下完整角膜组织，PBS 漂洗干净表面虹膜、色素杂质。

三、细胞分离与消化

角膜上皮面朝外，浸入 2.4U/mL DispaseⅡ 溶液，4℃冰箱冷消化 12~16h。

取出角膜，显微镊直接撕取表层角膜上皮薄层组织，剪碎至 1mm³ 小组织块。

加入 0.25% 胰酶 37℃消化 8min，培养基终止消化，反复吹打制成单细胞悬液。

四、纯化与接种培养

悬液过 200 目筛，1000rpm 离心 6min，弃上清洗涤细胞沉淀。

无血清上皮培养基重悬细胞，调整细胞密度接种。

培养箱培养，隔天换液，去除悬浮死细胞与少量内皮杂细胞。

1.手术获取组织后需立即在显微镜下剥离平滑肌层，避免成纤维细胞等杂细胞过度污染。

2.使用0.1%明胶包被培养皿可改善平滑肌细胞贴壁效率，尤其在原代培养初期效果显著。

3.该细胞体外传代能力较强，建议3-5代内使用，过高代次可能导致收缩表型标志物表达下降。

4.在DMEM培养基中补充10-20%FBS及1%青霉素-链霉素即可满足生长需求，必要时添加10ng/ml EGF。

5.培养期间每48小时换液，若发现细胞由梭形变为多角形可能提示表型转换，需调整实验时间窗。