大鼠脊髓神经少突胶质细胞

大鼠脊髓神经少突胶质细胞

运用酶消化-摇床振荡联合法从Sprague-Dawley大鼠脊髓神经少突胶质细胞新生鼠脑组织中分离原代胶质细胞，经密度梯度离心纯化后接种于纤连蛋白包被的培养表面，使用含 10% FBS 和 20 ng/mL PDGF-AA 的 DMEM/F12 培养基培养少突胶质前体细胞；通过免疫荧光检测 NG2、Olig2、PDGFR-α 表达，Western blot 分析 MBP（髓鞘碱性蛋白）和 CNPase 分化标志物，并经诱导分化实验验证髓鞘形成潜能。

产品名称：大鼠脊髓神经少突胶质细胞

英文名称： Rat Spinal Cord Oligodendrocytes

组织来源： 脊髓组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠脊髓神经少突胶质细胞采用胶原酶-胰酶联合消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠脊髓神经少突胶质细胞经GC（Galactocerebroside）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 大鼠脊髓神经少突胶质细胞完全培养基(含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠脊髓神经少突胶质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微剪镊灭菌；神经元专用培养基（Neurobasal+B27）、0.125% 胰酶、PBS；培养皿多聚赖氨酸包被过夜。

选用出生 24h 内乳鼠，全程冰上操作。

二、取材与预处理

断头取脊髓，仔细剥除所有脊膜（关键防杂细胞），预冷 PBS 漂洗 2 次。

剪碎脊髓组织，剔除明显血管结缔组织。

三、细胞分离与消化

胰酶 37℃消化 10min，轻柔吹打 3~5 次。

含血清培养基终止消化，充分吹打至无肉眼可见组织块。

200 目滤网过滤悬液。

四、纯化与接种培养

离心收集细胞，神经元培养基重悬，接种包被好的培养皿。

接种 4h 后全量换液去除漂浮死细胞与杂细胞。

每 3d 半量换液，可添加阿糖胞苷抑制胶质细胞增殖，获得高纯度脊髓神经元。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。