大鼠肌源性干细胞

大鼠肌源性干细胞

运用密度梯度离心法从Sprague-Dawley大鼠肌源性干细胞组织中分离间充质干细胞，经预培养去除非贴壁细胞后，选用含 10% FBS 和 2 mM L-谷氨酰胺的 DMEM/F12 培养基进行扩增；通过免疫荧光染色检测 Nanog、Oct4、Sox2 等多能性标志物表达，流式细胞术分析 CD34-、CD45-、HLA-DR- 表型，并经体外诱导分化实验（成骨/成脂/成软骨）验证多向分化潜能。

产品名称：大鼠肌源性干细胞

英文名称： Rat Myogenic Stem Cells

组织来源： 大腿骨骼肌组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肌源性干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶-胰蛋白酶联合消化法结合密度梯度离心、差速贴壁法，最后通过肌源性干细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肌源性干细胞经Sca-1免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 大鼠肌源性干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肌源性干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微解剖器械灭菌；0.25% 胰酶、DMEM 完全培养基、预冷 PBS；多聚赖氨酸包被培养皿。

解剖板、离心管、细胞筛无菌备用。

二、取材与预处理

大鼠断头处死，剪开椎板，完整取出整条脊髓，PBS 漂洗去除脑脊液与血液。

剔除脊髓表面脊膜、神经根组织，剪碎脊髓外周结缔组织部分。

三、细胞分离与消化

组织碎块胰酶 37℃消化 15min，轻柔吹打。

培养基终止消化，制备细胞悬液。

滤网过滤杂质组织。

四、纯化与接种培养

离心重悬细胞接种培养容器。

24h 换液，成纤维细胞优先贴壁，神经类细胞悬浮，弃上清纯化。

后续常规换液传代，得到脊髓来源成纤维细胞。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。