大鼠肌腱干细胞

大鼠肌腱干细胞

基于胶原酶消化-密度梯度离心联合策略从Sprague-Dawley大鼠肌腱干细胞组织获取干细胞组分，经差速贴壁纯化后接种于明胶包被培养皿中，使用含多种生长因子（bFGF 10 ng/mL、EGF 20 ng/mL 及 PDGF）的干细胞专用培养基培养；通过 RT-qPCR 检测 Oct4、Nanog、Sox2、KLF4 等多能性基因转录水平，免疫荧光显示 SSEA-1/TRA-1-60 抗原表达，并结合 colony-forming unit assay 评估克隆形成能力。

产品名称：大鼠肌腱干细胞

英文名称： Rat Tendon Stem Cells

组织来源： 肌腱组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肌腱干细胞采用胶原酶、中性蛋白酶混合消化法并通过肌腱干细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肌腱干细胞经CD44免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠肌腱干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肌腱干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

解剖器械灭菌；DMEM 低糖培养基、0.2% 胶原酶 + 0.1% 胰酶混合消化液、PBS；滤网。

准备幼龄大鼠骨骼肌（后腿腓肠肌），超净台紫外消毒。

二、取材与预处理

剥离大鼠后肢骨骼肌，剔除筋膜、血管、神经，PBS 洗净血迹。

剪碎肌肉组织，去除白色结缔组织，切成细小肉糜。

三、细胞分离与消化

混合消化液 37℃消化 1h，间歇吹打。

完全培养基终止消化，反复吹打分散细胞。

滤网过滤去除肌纤维大块残渣。

四、纯化与接种培养

离心取细胞沉淀，培养基重悬接种培养瓶。

差速贴壁 2h 换液，去除成纤维细胞。

常规培养换液，细胞增殖后传代，即为肌源性干细胞原代。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.使用未包被的常规培养瓶即可，成纤维细胞贴壁能力强，一般在24小时内即可见细胞从组织块边缘迁出。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.培养期间注意观察是否有成纤维细胞过度生长压制其他细胞类型的情况，必要时使用选择性培养基。