大鼠滑膜间充质干细胞

大鼠滑膜间充质干细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的滑膜间充质干细胞来源组织（骨髓/脐带/脂肪等）中分离间充质成分，经密度梯度离心纯化单核细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 α-MEM 培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过流式细胞术检测干细胞标志物 CD90、CD44、CD105、STRO-1 表达，结合三系分化能力验证

产品名称：大鼠滑膜间充质干细胞

英文名称： Rat Synovial Mesenchymal Stem Cells

组织来源： 膝关节滑膜组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠滑膜间充质干细胞采用混合酶消化法结合有限稀释法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠滑膜间充质干细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠滑膜间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠滑膜间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

常规解剖器械、无菌 PBS、0.25% 胰酶、基础 DMEM 完全培养基、细胞滤网灭菌备用。

超净台紫外消杀，实验耗材摆放就绪。

二、取材与预处理

打开大鼠四肢关节腔，刮取所有关节滑膜组织，PBS 冲洗 3 遍去除血污。

剔除多余结缔组织，剪切成细小组织碎块。

三、细胞分离与消化

胰酶 37℃消化 20~30min，轻柔吹打。

培养基终止消化，吹打混匀细胞悬液。

滤网过滤除去组织残渣。

四、纯化与接种培养

离心沉淀细胞，培养基重悬后接种培养瓶。

24h 换液去除漂浮杂质细胞。

常规隔天换液培养，所得为滑膜成纤维细胞 + 少量免疫类滑膜混合细胞，如需分群可后续分选纯化。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.成纤维细胞生长旺盛，贴壁后24小时即可见细胞迁出，约7-10天可首次传代。

4.培养基中添加10-15%胎牛血清即可满足成纤维细胞生长需求，高血清浓度可加速细胞增殖。

5.培养期间注意观察是否有成纤维细胞过度生长压制其他细胞类型的情况，必要时使用选择性培养基。