大鼠滑膜成纤维细胞

大鼠滑膜成纤维细胞

运用胶原酶 I 消化法从Sprague-Dawley大鼠滑膜成纤维细胞组织中提取间充质成分，经密度梯度离心去除血液细胞后，接种于胶原 IV 包被的培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术分析 CD90+、CD44+、CD105+ 阳性率及 CD34-、CD45- 阴性率，免疫荧光染色显示 vimentin 强阳性、角蛋白阴性，并经成纤维细胞集落形成实验验证增殖能力。

产品名称：大鼠滑膜成纤维细胞

英文名称： Rat Synovial Fibroblasts

组织来源： 膝关节滑膜组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠滑膜成纤维细胞采用混合酶消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠滑膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠滑膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠滑膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

器械灭菌；间充质干细胞专用 DMEM-LG 培养基、0.1%Ⅰ 型胶原酶、PBS；100/200 目细胞筛。

离心管、培养瓶提前灭菌，全程低温取材减少细胞损伤。

二、取材与预处理

分离大鼠膝髋关节滑膜组织，PBS 反复清洗，去除血液、脂肪、筋膜。

无菌剪将滑膜剪为细小组织糜，尽量切碎增大消化接触面积。

三、细胞分离与消化

胶原酶 37℃水浴振荡消化 1h，期间多次吹打。

含血清培养基终止酶解，吹打制备悬液。

双层滤网逐级过滤，去除大块组织残渣。

四、纯化与接种培养

1000r/min 离心 5min，弃上清，干细胞完全培养基重悬。

接种培养瓶，37℃培养；48h 首次换液，弃悬浮细胞。

每 3~4d 换液，细胞达 80% 融合传代，利用干细胞贴壁慢、增殖稳定特性纯化，可后续流式鉴定。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.培养过程中需注意CO2浓度维持在5%正负0.5%，pH值保持在7.2-7.4范围内。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。