产品名称 | 大鼠呼吸道上皮细胞 | 组织来源 | 呼吸道 |
英文名称 | Rat Respiratory Epithelial Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3182 |
方法简介 实验室分离的大鼠呼吸道上皮细胞采用链霉蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠呼吸道上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠呼吸道上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠呼吸道上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠α-甘油磷酸脱氢酶(α-GPDH)elisa试剂盒 | HCT15/5Fu人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株 |
大鼠抗α-胞衬蛋白IgG抗体(α-Fodrin IgG)elisa试剂盒 | 大鼠食管上皮细胞 |
大鼠α胞衬蛋白(α-fodrin)elisa试剂盒 | 大鼠颈动脉平滑肌细胞 |
大鼠α淀粉酶(α-AMS)elisa试剂盒 | NCI-H23 (人非小细胞肺癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠5α还原酶1型(5αRT 1)elisa试剂盒 | 人肺成纤维细胞Hs888Lu(STR鉴定正确) |
大鼠5α-双氢睾酮(5α-DHT)elisa试剂盒 | 人骨微血管内皮细胞 |
猪脂蛋白磷脂酶A2（Lp-PLA2）elisa试剂盒 | 小鼠原代真皮成纤维细胞 |
NCI-H292人肺癌(淋巴结转移)细胞专用培养基 | NEK5基因过表达细胞株 |
MET-5A人膜间皮细胞专用培养基 | APCDD1L基因过表达细胞株 |
大鼠原代心房心肌细胞专用培养基 | ALG10基因过表达细胞株 |
小鼠原代脑皮层神经元细胞专用培养基 | ZNF418基因过表达细胞株 |
人原代胸腺成纤维细胞专用培养基 | CLIC5基因过表达细胞株 |
大鼠呼吸道上皮细胞RM-1+luc细胞专用培养基 | FAM20A基因过表达细胞株 |
大鼠原代DRG神经元细胞专用培养基 | ARID3C基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
解剖器械高压灭菌；0.25% 胰酶、DMEM 完全培养基、预冷 PBS；200 目滤网。
超净台紫外消毒 30min，耗材无菌摆放。
二、取材与预处理
处死大鼠消毒后剪开膝关节皮肤，打开关节腔，用显微镊刮取关节内壁淡黄色滑膜组织。
PBS 漂洗滑膜组织去除血迹，剔除粘连脂肪组织，剪碎至 1mm³ 组织块。
三、细胞分离与消化
组织块加胰酶 37℃消化 25min，间断颠倒混匀。
完全培养基终止消化，充分吹打打散细胞。
滤网过滤除去未消化组织团块。
四、纯化与接种培养
离心收集细胞沉淀，培养基重悬接种培养瓶。
培养箱静置培养，24h 后换液去除悬浮杂细胞。
细胞汇合至 85% 进行传代，连续传 1~2 代即可获得纯化滑膜成纤维细胞。
