大鼠骺软骨细胞

大鼠骺软骨细胞

从Sprague-Dawley大鼠长骨骨膜或骨组织经胶原酶 I/II 联合消化获取骨细胞，经差速贴壁纯化后接种于玻连蛋白包被的培养皿中，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过免疫荧光检测骨细胞标志物 E11/gp38、Piezo1、SOST（硬化蛋白）及 DMP1 表达，并采用共培养体系与破骨细胞前体细胞共培养验证成骨-破骨偶联信号传导功能。

产品名称：大鼠骺软骨细胞

英文名称： Rat Epiphyseal Chondrocytes

组织来源： 生长板组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠骺软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化并软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠骺软骨细胞，P0代经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠骺软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每3-4天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠骺软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

器械灭菌，配制 DMEM/F12 上皮培养基、0.1% 蛋白酶 + 胶原酶混合消化液、无菌 PBS；培养皿多聚赖氨酸包被。

准备麻醉用品、解剖板、细胞筛、离心管。

二、取材与预处理

大鼠麻醉处死，消毒颈部胸腔，逐层分离气管与主支气管，完整取出气道组织。

PBS 灌洗气道管腔 3 次冲除黏液与杂质，纵向剪开气管，刮取气道内侧上皮层，收集组织碎屑。

三、细胞分离与消化

上皮碎屑加入混合消化液，37℃消化 30min，每隔 10min 吹打一次。

血清培养基终止消化，吹打混匀细胞悬液。

过 200 目滤网过滤，收集滤液。

四、纯化与接种培养

离心弃上清，专用上皮培养基重悬细胞。

接种包被培养瓶，差速贴壁 1.5h 换液去除成纤维细胞。

隔日换液，待上皮细胞形成铺路石样单层后传代扩增纯化。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.使用未包被的常规培养瓶即可，成纤维细胞贴壁能力强，一般在24小时内即可见细胞从组织块边缘迁出。

3.该细胞增殖迅速，原代培养2-3周可获得足够细胞，传代后可维持培养15-20代左右。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。