大鼠虹膜色素上皮细胞

大鼠虹膜色素上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从Sprague-Dawley大鼠靶组织中分离虹膜色素上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：大鼠虹膜色素上皮细胞

英文名称： Rat Iris Pigment Epithelial Cells

组织来源： 虹膜组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠虹膜色素上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠虹膜色素上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠虹膜色素上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠虹膜色素上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微解剖器械灭菌；配制 0.2%Ⅱ 型胶原酶、DMEM 高糖完全培养基、无菌 PBS；200 目滤网。

选取幼龄 SD 大鼠（2~4 周龄），实验台面提前紫外灭菌。

二、取材与预处理

处死大鼠消毒后剥离四肢皮肤肌肉，截取股骨、胫骨两端骨骺端白色透明软骨组织，剔除骨膜、骨组织、韧带。

预冷 PBS 反复冲洗软骨组织，剪切成 1mm³ 极小组织碎块。

三、细胞分离与消化

软骨碎块加入 Ⅱ 型胶原酶，37℃摇床消化 2.5~3h 至组织基本消散。

加入完全培养基终止消化，反复吹打制备单细胞悬液。

滤网过滤残渣，收集细胞悬液。

四、纯化与接种培养

1000rpm 离心 5min，弃上清，完全培养基重悬细胞。

接种培养瓶，5% CO₂培养箱静置培养。

24h 换液，后续 2~3d 换液，细胞长满后传代，避免多次传代导致细胞去分化。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。