大鼠颌下腺上皮细胞

大鼠颌下腺上皮细胞

基于组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的颌下腺上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：大鼠颌下腺上皮细胞

英文名称： Rat Submandibular Gland Epithelial Cells

组织来源： 颌下腺组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠颌下腺上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠颌下腺上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠颌下腺上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠颌下腺上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微解剖剪、显微镊高压灭菌；配制含 10% FBS DMEM 培养基、0.25% 胰酶、无菌 PBS；培养皿提前预冷。

75% 酒精、无菌棉签、眼科环钻、离心管、细胞筛灭菌备用。

二、取材与预处理

大鼠处死消毒眼球周围组织，摘取双侧眼球，PBS 浸泡清洗眼球外壁血迹。

显微镜下沿角膜缘环形剪开眼球壁，去除晶状体、玻璃体，小心剥离虹膜组织，PBS 漂洗 2 次。

剪碎虹膜组织至细小碎屑，尽量剥离附着非色素结缔组织。

三、细胞分离与消化

组织加入胰酶消化液，37℃消化 15min，间断吹打。

培养基终止消化，充分吹打解离细胞团。

滤网过滤去除组织块，收集细胞悬液。

四、纯化与接种培养

低速离心弃上清，培养基重悬细胞沉淀接种培养皿。

37℃培养，48h 首次换液，去除漂浮死亡细胞。

利用上皮样细胞贴壁特性，每 3d 换液，传代 2 次后去除成纤维细胞污染，得到纯化虹膜色素上皮细胞。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。