大鼠颌骨成纤维细胞

大鼠颌骨成纤维细胞

从Sprague-Dawley大鼠颌骨成纤维细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：大鼠颌骨成纤维细胞

英文名称： Rat Jaw Fibroblasts

组织来源： 颌骨组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠颌骨成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠颌骨成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠颌骨成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠颌骨成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

解剖器械高压灭菌，超净台紫外消杀；提前分装预冷无菌 PBS、完全培养基、0.1%Ⅰ 型胶原酶消化液。

配制上皮专用培养基：DMEM/F12+15% FBS+1% 双抗 + 表皮生长因子 EGF；备好 100 目、200 目细胞筛。

培养瓶用多聚赖氨酸包被 30min，弃液晾干备用，提升上皮贴壁能力。

二、取材与预处理

大鼠处死后酒精消毒颈部区域，剪开颈前皮肤，暴露颌下腺腺体，小心分离腺体包膜与结缔组织，完整摘取双侧颌下腺。

预冷 PBS 漂洗腺体 3 次，剔除表面脂肪与筋膜，无菌条件下剪切成 0.5mm³ 细小组织碎块。

三、细胞分离与消化

组织碎块加入 Ⅰ 型胶原酶消化液，37℃摇床低速振荡消化 40min。

加入等量完全培养基终止消化，反复吹打制成单细胞悬液。

依次过 100 目、200 目滤网过滤，去除大块组织残渣。

四、纯化与接种培养

滤液 800r/min 离心 6min，弃上清，上皮完全培养基重悬沉淀。

接种至包被好的培养瓶，37℃培养箱培养；采用差速贴壁法：接种 2h 后换液，去除快速贴壁成纤维细胞。

每 2d 更换培养基，待上皮细胞成片生长后传代，获得纯化颌下腺上皮细胞。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.实验选用SD大鼠或Wistar大鼠，年龄和体重需符合实验标准要求。 细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。