大鼠冠状动脉内皮细胞

大鼠冠状动脉内皮细胞

从Sprague-Dawley大鼠冠状动脉内皮细胞组织标本经胶原酶-弹性蛋白酶联合消化获取单细胞悬液，通过 Percoll 密度梯度离心纯化内皮细胞组分，接种于纤维连接蛋白预包被的培养皿中，使用内皮基础培养基 supplemented with 多种生长因子（VEGF、FGF-2、IGF-1 及 Ascorbic acid）维持培养；通过免疫荧光染色显示 CD31 膜染色阳性、vWF 胞质颗粒状表达，并结合乙酰化 LDL 荧光摄取实验和内皮管腔形成 assay 综合鉴定。

产品名称：大鼠冠状动脉内皮细胞

英文名称： Rat Coronary Artery Endothelial Cells

组织来源： 冠状动脉

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠冠状动脉内皮细胞采用混合酶短暂消化后组织贴块、结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠冠状动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠冠状动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠冠状动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 包被培养板（明胶 / 纤连蛋白）；ECM 内皮培养基、胶原酶、无菌显微器械

二、取材与预处理

1. 摘取心脏，生理盐水逆行灌注冠脉，剥离冠状动脉主干及分支

2. 冰 PBS 洗净管腔淤血

三、细胞分离与消化

1. 血管纵向剪开，内膜面向下浸泡胶原酶溶液 37℃消化 25min

2. 轻柔刮取血管内壁细胞，培养基中和消化反应

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液离心后接种预包被培养皿

2. 24h 换液去除未贴壁杂细胞，内皮专用培养基培养

3. 免疫鉴定后用于后续实验

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养表面需用0.01mg/ml纤连蛋白和0.1mg/ml多聚赖氨酸双重包被，神经元贴壁率和轴突延伸长度均有显著提升。

3.神经元为终末分化细胞，体外不具备增殖能力，建议分离后3-5天内完成电生理记录或免疫荧光等功能实验。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.换液时仅半量更换新鲜培养基，完全换液会破坏神经元依赖的神经营养因子微环境，造成大量神经元轴突断裂、漂浮死亡。