大鼠骨外膜细胞
采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的骨外膜细胞来源组织中分离原代细胞，经胶原酶 II 和胰蛋白酶联合消化后，通过密度梯度离心纯化目标细胞，接种于明胶包被的培养皿中使用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、1% 双抗）培养；通过免疫荧光染色检测细胞特异性标志物表达，结合形态学观察和 RT-qPCR 分子鉴定确认细胞身份。
产品名称：大鼠骨外膜细胞
英文名称： Rat Periosteal Cells
组织来源： 骨外膜组织
默认种属 ：SD大鼠
产品规格：5×10^5Cells/T25
方法简介 实验室分离的大鼠骨外膜细胞采用胶原酶消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠骨外膜细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠骨外膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠骨外膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
一、实验前准备
1. 器械：精细眼科镊、显微剪、培养皿；试剂：0.1%Ⅰ 型胶原酶、DMEM 完全培养基、PBS
二、取材与预处理
1. 处死大鼠，剥离四肢长骨表面肌肉结缔组织，充分暴露骨外膜
2. 显微镊小心剥离长条骨外膜组织，PBS 漂洗去除血迹
三、细胞分离与消化
1. 骨外膜剪碎至 1mm³，加入 Ⅰ 型胶原酶 37℃水浴消化 90min
2. 间断吹打，培养基终止消化，过 70μm 滤网收集滤液
四、纯化与接种培养
1. 滤液离心洗涤 2 次，完全培养基重悬接种培养瓶
2. 差速贴壁去除杂细胞，3 天首次换液
3. 细胞汇合后胰酶传代纯化培养
1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。
2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。
3.长期培养中需定期检测细胞标志物表达，确保细胞身份和纯度不受影响。
4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。
5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。
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