产品名称 | 大鼠骨髓基质细胞 | 组织来源 | 腿骨髓组织 |
英文名称 | Rat Bone Marrow Stromal Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2789 |
方法简介 实验室分离的大鼠骨髓基质细胞采用密度梯度离心法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠骨髓基质细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠骨髓基质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠骨髓基质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠β1肾上腺素受体(β1AR)elisa试剂盒 | H9/HTLV-IIIB人T淋巴瘤白血病细胞 |
大鼠α-微管蛋白(α-tubulin)elisa试剂盒 | 大鼠颈动脉内皮细胞 |
大鼠α-突触核蛋白寡聚体(α-Syn)elisa试剂盒 | 大鼠肺动脉平滑肌细胞 |
大鼠α-分泌酶(α-Secretase)elisa试剂盒 | KiMA (人胚肾上皮细胞) |
大鼠3-琥珀酰辅酶A转移酶1(OXCT1)elisa试剂盒 | 人皮肤成纤维细胞Hs865.Sk(STR鉴定正确) |
大鼠3-甲氧基去甲肾上腺素(NMN)elisa试剂盒 | 大鼠胆囊上皮细胞 |
猪中性蛋白酶（NP）elisa试剂盒 | 人原代CD3+T淋巴细胞 |
Marc145非洲绿猴胚胎肾细胞专用培养基 | GABRR2基因过表达细胞株 |
MDA-MB-231+LUC人乳腺癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | EPHX4基因过表达细胞株 |
小鼠原代胰岛细胞专用培养基 | CLPB基因过表达细胞株 |
小鼠原代支气管平滑肌细胞专用培养基 | ZFTA基因过表达细胞株 |
人原代胰腺星状细胞专用培养基 | PCDHB7基因过表达细胞株 |
大鼠骨髓基质细胞Raji细胞专用培养基 | CEP41基因过表达细胞株 |
人原代肺动脉平滑肌细胞专用培养基 | MMP9基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 试剂：DMEM 低糖、胎牛血清、PBS、双抗；器械：解剖套装、滤网、离心管
2. 动物：4 周龄 SD 大鼠
二、取材与预处理
1. 处死大鼠取股骨胫骨，剪开骨骺端，注射器吸取 PBS 反复冲洗骨髓腔收集骨髓
2. 吹打至无明显骨髓团块，滤网过滤除去骨碎片
三、细胞分离与消化
1. 骨髓悬液直接离心 1000rpm 5min，弃上清
2. 无需酶消化，培养基重悬沉淀即可
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液接种培养瓶，37℃培养 4h，弃悬浮未贴壁细胞（去除造血系细胞）
2. 补加新鲜完全培养基继续培养，每 3 天换液一次
3. 细胞汇合至 80% 使用胰酶传代纯化，即为骨髓基质细胞
