产品名称 | 大鼠骨骼肌卫星细胞 | 组织来源 | 大腿骨骼肌组织 |
英文名称 | Rat Skeletal Muscle Satellite Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3330 |
方法简介 实验室分离的大鼠骨骼肌卫星细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合多次差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠骨骼肌卫星细胞经Desmin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 大鼠骨骼肌卫星细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠骨骼肌卫星细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠β-淀粉酶(β-amylase)elisa试剂盒 | GBC-SD+LUC 人胆囊癌细胞荧光素酶标记 |
大鼠β2 肾上腺素受体抗体(β2-AR Ab)elisa试剂盒 | 大鼠主动脉平滑肌细胞 |
大鼠β1 肾上腺素受体抗体(β1-AR Ab)elisa试剂盒 | 人扁桃体静脉平滑肌细胞 |
大鼠α-突触核蛋白(α-Syn)elisa试剂盒 | Li-7 (人肝癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠3,4-二羟基苯基二醇(DHPG)elisa试剂盒 | 表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞293FT(STR鉴定正确) |
大鼠3α羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD)elisa试剂盒 | 人胆囊平滑肌细胞 |
猪中性粒细胞趋化因子1（CINC-1）elisa试剂盒 | 大鼠原代子宫成纤维细胞 |
COS-7非洲绿猴肾 SV40转化 细胞专用培养基 | TLR1基因过表达细胞株 |
MDA-MB-231人乳腺癌细胞专用培养基 | C19orf44基因过表达细胞株 |
小鼠原代脂肪细胞专用培养基 | FAM149A基因过表达细胞株 |
兔原代膀胱平滑肌细胞专用培养基 | CCT6B基因过表达细胞株 |
人原代增生性瘢痕成纤维细胞专用培养基 | ACTRT3基因过表达细胞株 |
大鼠骨骼肌卫星细胞PY8119+GFP细胞专用培养基 | CD226基因过表达细胞株 |
大鼠原代脊髓微血管内皮细胞专用培养基 | ACTRT2基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 器械：眼科剪、眼科镊、手术直剪、弯镊、无菌培养皿、离心管、滤网（70μm）
2. 试剂：PBS 缓冲液、DMEM 完全培养基、0.25% 胰蛋白酶 - EDTA、Ⅰ 型胶原酶、双抗（青霉素 + 链霉素）
3. 耗材：细胞培养瓶、移液管、冻存管；动物：2~4 周龄 SD 大鼠
二、取材与预处理
1. 大鼠颈椎脱臼处死，75% 酒精全身浸泡消毒 5min，固定于无菌操作台板
2. 逐层剪开后肢皮肤，剥离双侧腓肠肌、比目鱼肌，剔除血管、脂肪、结缔组织
3. 无菌 PBS 反复漂洗肌肉组织 3 次，剪碎至 1mm³ 细小肉糜
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入 Ⅰ 型胶原酶（2mg/mL），37℃水浴振荡消化 45min
2. 补加等量 0.25% 胰酶，继续 37℃消化 15min，期间每 5min 吹打一次
3. 加入含血清完全培养基终止消化，70μm 细胞筛过滤悬液，收集滤液
四、纯化与接种培养
1. 滤液 1200r/min 离心 5min，弃上清，PBS 重悬洗涤 2 次
2. 差速贴壁纯化：细胞悬液铺于培养瓶，37℃孵育 90min，吸出未贴壁上清（去除成纤维细胞）
3. 上清接种新培养瓶，加入骨骼肌卫星细胞专用完全培养基，37℃5% CO₂常规培养
