大鼠肝内胆管上皮细胞

大鼠肝内胆管上皮细胞

运用预灌注-消化联合技术从Sprague-Dawley大鼠肝脏获取肝实质细胞和胆管上皮细胞混合群体，经密度梯度离心分离不同密度组分后，分别培养肝细胞（William's E 培养基）和胆管上皮细胞（K-SFM 培养基）；通过免疫荧光检测肝细胞标志物 Albumin、HNF-4α 及胆管标志物 CK7、CK19 表达，Western blot 分析谷氨酰胺合成酶（GS）和谷胱甘肽 S-转移酶（GST）活性，并评估肝细胞药物代谢功能。

产品名称：大鼠肝内胆管上皮细胞

英文名称： Rat Intrahepatic Bile Duct Epithelial Cells

组织来源： 肝脏组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肝内胆管上皮细胞采用胶原酶灌注消化法后，再用胶原酶-DNA酶联合消化，接种至预先包被鼠尾胶原的培养瓶中，通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肝内胆管上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠肝内胆管上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肝内胆管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

蠕动泵、门静脉留置针、无钙 HEPES 灌流液、胶原酶 Ⅳ 消化液、冰 DMEM 培养基、无菌手术器械。

二、取材与预处理

大鼠麻醉，开腹门静脉插管，剪断肾后下腔静脉建立流出通道，预灌流冲净肝脏循环血液。

三、细胞分离与消化

第一灌流：无钙缓冲液持续灌注至肝脏发白无血。

第二灌流：胶原酶消化液循环原位灌流 15~20min，肝脏变软松弛后摘取。

轻柔撕碎肝包膜，培养基吹打释放肝细胞，纱布粗滤去除结缔组织。

四、纯化与接种培养

50g 低速短时间离心 3 次，去除非实质细胞与破碎细胞。

完全培养基重悬肝细胞，接种胶原包被培养板。

4~6h 贴壁后换液，去除漂浮死细胞，肝细胞多用于原代短期药物毒性实验。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。