大鼠肝枯否细胞

大鼠肝枯否细胞

运用 Percoll 密度梯度离心法从Sprague-Dawley大鼠肝枯否细胞外周血或组织中提取单个核细胞，经免疫磁珠分选（MACS）或流式分选（FACS）纯化目标免疫细胞亚群后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，使用含细胞因子（IL-4、IL-13 或 GM-CSF）的 IMDM 培养基培养；通过流式细胞术多色分析 CD11c、MHC-II、CD80/86 等共刺激分子表达谱，结合 ELISA 检测细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-10）分泌水平鉴定免疫细胞功能表型。

产品名称：大鼠肝枯否细胞

英文名称： Rat Kupffer Cells

组织来源： 肝脏组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肝枯否细胞采用混合酶灌流消化、低速离心、密度梯度离心、差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肝枯否细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠肝枯否细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、巨噬细胞

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 利多卡因（12 mM）

大鼠肝枯否细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

肝脏原位灌流套装、胶原酶、Percoll 梯度液、RPMI 培养基、无菌插管器械。

二、取材与预处理

门静脉插管原位灌流去除肝内血液，胶原酶灌流消化肝组织。

三、细胞分离与消化

撕碎消化后肝脏组织，过滤制备细胞悬液；通过 Percoll 双层密度梯度离心分层。

四、纯化与接种培养

收集中间层枯否细胞，离心洗涤后铺板；贴壁 2h 洗去未黏附细胞，即为纯化枯否细胞，适合原代实验。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.细胞生长速率受血清批次影响较大，建议实验前对不同批次血清进行预实验筛选。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。