大鼠肝窦内皮细胞

大鼠肝窦内皮细胞

运用预灌注-消化联合技术从Sprague-Dawley大鼠肝脏获取肝实质细胞和胆管上皮细胞混合群体，经密度梯度离心分离不同密度组分后，分别培养肝细胞（William's E 培养基）和胆管上皮细胞（K-SFM 培养基）；通过免疫荧光检测肝细胞标志物 Albumin、HNF-4α 及胆管标志物 CK7、CK19 表达，Western blot 分析谷氨酰胺合成酶（GS）和谷胱甘肽 S-转移酶（GST）活性，并评估肝细胞药物代谢功能。

产品名称：大鼠肝窦内皮细胞

英文名称： Rat Liver Sinusoidal Endothelial Cells

组织来源： 肝脏组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肝窦内皮细胞采用混合酶灌流消化、反复低速离心、密度梯度离心法，并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肝窦内皮细胞经CD31或CD14免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠肝窦内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肝窦内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

门静脉插管、灌流泵、IV 型胶原酶、无钙灌流液、含钙消化液、Percoll 分离液、离心管。

二、取材与预处理

大鼠麻醉固定，开腹暴露门静脉，穿刺插管固定，剪断下腔静脉作为流出道。

预热灌流液准备体外肝脏原位灌流。

三、细胞分离与消化

第一步无钙灌流冲净肝脏内血液；第二步胶原酶循环灌流消化肝脏实质。

取下肝脏撕碎，培养基吹打制成粗细胞悬液，滤网过滤。

Percoll 密度梯度离心分层分离肝窦内皮细胞组分。

四、纯化与接种培养

吸取目标细胞层，离心洗涤去除分离液。

专用培养基接种铺板，37℃培养。

4h 换液去除枯否细胞、肝细胞等杂细胞，短期原代使用。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。