大鼠肺小动脉平滑肌细胞

大鼠肺小动脉平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的肺小动脉平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：大鼠肺小动脉平滑肌细胞

英文名称： Rat Pulmonary Arteriolar Smooth Muscle Cells

组织来源： 肺小动脉组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肺小动脉平滑肌细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肺小动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠肺小动脉平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肺小动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

超细显微剪镊、胶原酶混合液（胶原酶 Ⅰ+ 弹性蛋白酶）、无菌培养基、滤网、离心耗材。

二、取材与预处理

完整取出肺叶，在体视显微镜下精细分离细小肺动脉分支，剥离周边肺实质组织。

PBS 漂洗小动脉血管段，去除血迹。

三、细胞分离与消化

剪碎细小血管组织，混合酶 37℃恒温消化 40min，间断吹打。

胎牛血清终止消化，吹打制备细胞悬液。

200 目筛网过滤除去组织碎屑。

四、纯化与接种培养

离心收集细胞沉淀，培养基重悬接种。

差速贴壁去除成纤维细胞污染，前 48h 少量多次换液纯化。

细胞增殖呈束状生长后分瓶传代。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。