大鼠肺泡巨噬细胞

大鼠肺泡巨噬细胞

从Sprague-Dawley大鼠肺泡巨噬细胞组织标本经机械研磨与胶原酶消化获取单细胞悬液，通过 Ficoll-Paque 密度梯度离心分离淋巴细胞层，经红细胞裂解液处理后再悬浮于含 10% FBS 的 RPMI-1640 培养基中，添加特异性细胞因子（如 IL-2 维持 T 细胞活性、IL-4 诱导 M2 极化）进行体外培养；通过免疫荧光染色检测 CD68、CD163（巨噬细胞极化标志）、CD3/CD4/CD8（T细胞标志）表达。

产品名称：大鼠肺泡巨噬细胞

英文名称： Rat Alveolar Macrophages

组织来源： 肺组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肺泡巨噬细胞采用肺泡灌洗结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肺泡巨噬细胞经F4/80免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠肺泡巨噬细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 巨噬细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 利多卡因（12 mM）

大鼠肺泡巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

套管针、注射器、无菌 PBS（含 EDTA + 双抗）、离心管、培养板。

麻醉处死大鼠，超净台消毒完毕。

二、取材与预处理

颈部切口暴露气管，气管插管固定套管针，结扎防止漏液。

胸腔放血处死大鼠，避免血液灌入肺泡污染。

三、细胞分离与消化

每次缓慢注入 5mL 预冷灌洗液，轻柔按压胸腔后回抽液体，重复灌洗 6~8 次。

合并所有灌洗液，即为肺泡巨噬细胞粗悬液，无需酶消化。

4℃静置短暂沉降大组织杂质。

四、纯化与接种培养

1200r/min 离心 8min，弃上清，PBS 洗涤沉淀 2 次。

RPMI1640 完全培养基重悬，接种细胞培养板。

37℃培养 2h，巨噬细胞可快速贴壁，弃上清洗掉未贴壁上皮杂细胞，后续培养使用。

1.手术获取组织后需立即在显微镜下剥离平滑肌层，避免成纤维细胞等杂细胞过度污染。

2.常规培养皿经PBS冲洗后即可使用，平滑肌细胞具有较强的自主贴壁能力。

3.培养过程中需注意CO2浓度维持在5%正负0.5%，pH值保持在7.2-7.4范围内。

4.培养基中添加20%胎牛血清和10ng/ml血小板衍生生长因子(PDGF)可显著促进平滑肌细胞增殖。

5.换液时弃去旧培养基后用PBS轻柔洗涤一次再加入新鲜培养基，可减少代谢废物积累。