大鼠肺动脉成纤维细胞

大鼠肺动脉成纤维细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的肺动脉成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：大鼠肺动脉成纤维细胞

英文名称： Rat Pulmonary Artery Fibroblasts

组织来源： 肺大动脉组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肺动脉成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肺动脉成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肺动脉成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

无菌解剖器械、胰酶消化液、双抗 PBS、DMEM 完全培养基、细胞筛、离心管。

二、取材与预处理

取下肺动脉血管及外周疏松结缔组织，剔除血管内皮与平滑肌主层组织，保留外膜结缔组织。

PBS 冲洗组织内残留血液杂质。

三、细胞分离与消化

组织剪充分剪碎至糊状，0.25% 胰酶 37℃消化 20min。

血清终止消化，强力吹打分散细胞团。

双层滤网过滤获得单细胞悬液。

四、纯化与接种培养

离心洗涤细胞悬液两次。

培养基重悬后接种培养，24h 换液除去漂浮死细胞与杂细胞。

每 3 日换液，细胞融合后传代扩增。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养板需提前用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，未包被表面内皮细胞贴壁效率极低且形态不规则。

3.细胞生长速率受血清批次影响较大，建议实验前对不同批次血清进行预实验筛选。

4.培养基中需添加10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和10ug/ml肝素，促进内皮细胞增殖并维持表型。

5.培养期间每48小时换液一次，观察细胞融合情况，融合度达90%以上时进行传代处理。