大鼠肺大动脉平滑肌细胞

大鼠肺大动脉平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的肺大动脉平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：大鼠肺大动脉平滑肌细胞

英文名称： Rat Pulmonary Great Artery Smooth Muscle Cells

组织来源： 肺大动脉组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肺大动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肺大动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠肺大动脉平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肺大动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

显微手术器械、离心管、筛网、培养瓶；胶原酶 Ⅰ、胰酶、平滑肌专用培养基、无菌 PBS。

操作台紫外消毒，大鼠麻醉用品准备齐全。

二、取材与预处理

开胸摘取肺大动脉，剔除外膜多余脂肪结缔组织，PBS 漂洗血管内外血迹。

纵向剪开血管管壁，用棉签轻柔刮除血管内侧内皮单层细胞，彻底去除内皮层。

三、细胞分离与消化

将血管中膜剪碎至 1mm³ 碎块，加入 0.1% 胶原酶 Ⅰ 37℃消化 30min。

加入完全培养基终止消化，充分吹打打散组织团块。

200 目滤网过滤，收集单细胞悬液。

四、纯化与接种培养

离心洗涤细胞悬液 2 次，培养基重悬细胞沉淀。

按合适密度接种培养瓶，37℃培养；差速贴壁法去除少量成纤维细胞杂细胞。

2~3 天换液，细胞长至致密梭形峰谷状形态后常规传代。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.成纤维细胞生长旺盛，贴壁后24小时即可见细胞迁出，约7-10天可首次传代。

4.培养基中添加10-15%胎牛血清即可满足成纤维细胞生长需求，高血清浓度可加速细胞增殖。

5.换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，成纤维细胞代谢旺盛需及时补充营养和清除代谢产物。