大鼠腓肠肌细胞

大鼠腓肠肌细胞

从Sprague-Dawley大鼠腓肠肌或胫前肌组织经机械分离与胶原酶 XXIV 消化获取肌源性细胞，经密度梯度离心纯化后接种于明胶/纤连蛋白双包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、1% 谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）进行原代培养；通过免疫荧光双标检测 Desmin/MyoD1 共表达，Western blot 分析肌球蛋白重链（MyHC）同工酶表达谱，并采用低血清培养基诱导肌管分化后检测肌管直径和核定位评估肌再生能力。

产品名称：大鼠腓肠肌细胞

英文名称： Rat Gastrocnemius Muscle Cells

组织来源： 小腿骨骼肌组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠腓肠肌细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠腓肠肌细胞经α-Sarcomeric actin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 大鼠腓肠肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠腓肠肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 试剂：无菌 PBS、0.2%Ⅰ 型胶原酶 + 0.1% 胰酶混合消化液、骨骼肌完全培养基（DMEM+20% 胎牛血清 + 双抗）。

2. 解剖剪、镊子、滤网、离心管高压灭菌；超净台紫外消毒，水浴 37℃预热。

二、取材与预处理

1. 大鼠脱颈处死，75% 酒精消毒后肢皮肤，完整剥离双侧腓肠肌肌肉组织。

2. 冰 PBS 反复漂洗肌肉，剔除肌腱、脂肪、筋膜、血管等多余结缔组织。

3. 将肌肉剪切成肉糜状细小组织块。

三、细胞分离与消化

1. 组织加入混合消化液，37℃水浴消化 60min，每 15min 反复吹打打散肌束。

2. 加入血清培养基终止消化，1200r/min 离心 6min 弃上清。

3. PBS 重悬沉淀洗涤 2 次，去除消化酶残留。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液先后过 100 目、200 目滤网过滤，离心收集肌卫星细胞沉淀。

2. 完全培养基重悬接种培养瓶，差速贴壁 1h 去除成纤维细胞杂细胞，转移上清至新培养瓶。

3. 37℃培养，每 2 天换液；细胞增殖融合后可更换分化培养基诱导肌管形成。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.培养基中需添加10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和10ug/ml肝素，促进内皮细胞增殖并维持表型。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。