大鼠大隐静脉平滑肌细胞

大鼠大隐静脉平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从Sprague-Dawley大鼠的大隐静脉平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：大鼠大隐静脉平滑肌细胞

英文名称： Rat Great Saphenous Vein Smooth Muscle Cells

组织来源： 大隐静脉组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠大隐静脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠大隐静脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 大鼠大隐静脉平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠大隐静脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 试剂：无菌 PBS、0.1%Ⅱ 型胶原酶、DMEM 高糖完全培养基（10% FBS + 双抗）。

2. 显微解剖器械、离心管、滤网灭菌；超净台、37℃水浴提前准备。

二、取材与预处理

1. 大鼠后肢解剖分离大隐静脉，肝素 PBS 冲净管腔血液，剪下血管。

2. 纵向剪开血管管壁，用棉签轻柔擦拭血管内膜，彻底去除内皮细胞。

3. 剥离血管外膜结缔组织，仅保留中膜平滑肌层，剪碎组织至 1mm³ 碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入 Ⅱ 型胶原酶消化液，37℃摇床消化 70~90min，期间多次轻柔吹打。

2. 血清培养基终止酶解，1000rpm 离心 5min 弃上清。

3. PBS 洗涤细胞沉淀两次。

四、纯化与接种培养

1. 悬液过 200 目筛网，离心收集细胞，完全培养基重悬接种培养瓶。

2. 37℃培养箱静置培养，24h 换液去除漂浮碎片与杂细胞。

3. 每 2~3 天更换培养基，细胞铺满瓶底后胰酶消化传代，可采用酶消化法 / 组织贴块法两种方式扩增。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。