产品名称 | 大鼠成骨细胞 | 组织来源 | 颅骨组织 |
英文名称 | Rat Osteoblasts | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2996 |
方法简介 实验室分离的大鼠成骨细胞采用先用胰蛋白酶短时间消化、后用胶原酶反复消化制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠成骨细胞经ALP染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠成骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠成骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取胫骨/股骨/关节软骨等组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS
分离纯化步骤
取实验动物目标骨组织或软骨组织，仔细去除软组织包膜
骨组织：剪碎后用0.25%胰蛋白酶消化20分钟，再加入II型胶原酶消化60-90分钟
软骨组织：剪碎后直接用II型胶原酶37度振荡消化4-6小时
消化液经70um和40um滤网过滤，400g离心10分钟收集细胞
原代培养要点
成骨细胞：使用DMEM+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养，细胞呈多角形贴壁
软骨细胞：使用DMEM/F12+10%FBS+10ng/mL TGF-beta3培养基，可悬浮或三维培养
成骨细胞培养14-21天后可检测到ALP活性和矿化结节形成
软骨细胞传代后易去分化，建议采用低传代次数(2-3代)或三维球状培养维持表型
常见问题优化
骨细胞得率低：延长胶原酶消化时间至90分钟，或采用两次消化法
软骨细胞去分化：采用高浓度悬浮培养(1x10^5 cells/mL)维持软骨表型
成骨细胞污染：采用差速贴壁法或免疫磁珠分选提高成骨细胞纯度
大鼠β-乳球蛋白(β-LG)elisa试剂盒 | panc02+LUC小鼠胰腺癌细胞荧光素酶标记 |
大鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)elisa试剂盒 | 人输尿管平滑肌细胞 |
大鼠β-羟丁酸脱氢酶(β-HBDH)elisa试剂盒 | 人肾小球系膜细胞 |
大鼠β-葡萄糖醛酸酶(β-Glu)elisa试剂盒 | HFL1 (人胚肺成纤维细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠17,20-裂解酶(17-OHD)elisa试剂盒 | 人肾癌细胞769-P(STR鉴定正确) |
大鼠17β-雌二醇(17β-E2)elisa试剂盒 | 大鼠脾淋巴细胞 |
猪总胆固醇（TC）elisa试剂盒 | 兔原代口腔黏膜成纤维细胞 |
CHL中国仓鼠肺细胞专用培养基 | FAM181A基因过表达细胞株 |
LOVO+LUC人结直肠癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | AADAT基因过表达细胞株 |
小鼠原代海绵体平滑肌细胞专用培养基 | CCDC61基因过表达细胞株 |
人原代神经干细胞专用培养基 | CHST15基因过表达细胞株 |
人原代子宫内膜异位症间质细胞专用培养基 | TLR1基因过表达细胞株 |
大鼠成骨细胞Panc08.13细胞专用培养基 | DIPK2B基因过表达细胞株 |
原代皮肤成纤维细胞（湖羊）专用培养基 | PCSK1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 试剂：预冷 PBS（双抗）、0.25% 胰酶、0.1%Ⅰ 型胶原酶、成骨完全培养基（α-MEM+15% 胎牛血清 + 双抗）。
2. 器械：骨剪、精细镊子、培养皿、离心管、滤网高压灭菌；超净台消毒。
3. 选用新生 24h 内乳鼠，活性最佳。
二、取材与预处理
1. 乳鼠脱颈处死，75% 酒精浸泡 5min 消毒，剥离颅骨、股骨、胫骨，剔除附着肌肉、筋膜、骨膜外软组织。
2. 预冷 PBS 浸泡骨组织，刮除表面骨膜，剪碎骨块至 1mm³ 骨粒。
三、细胞分离与消化
1. 骨粒加入 0.1%Ⅰ 型胶原酶，37℃消化 20min 弃第一次消化液（去除成纤维细胞）。
2. 再次加入胶原酶消化液，37℃分次消化 3 次，每次 30min，分次收集上清。
3. 合并所有上清，加入培养基终止消化，1000r/min 离心 5min 收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. PBS 洗涤沉淀 2 次，完全培养基重悬单细胞悬液。
2. 接种于培养瓶，37℃培养箱静置培养，48h 首次换液去除未贴壁杂质。
3. 每 2~3 天换液，细胞长满 85%~90% 使用胰酶消化传代；可加 β- 甘油磷酸钠、维生素 C 诱导矿化。
