大鼠肠微血管内皮细胞

大鼠肠微血管内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从Sprague-Dawley大鼠的肠微血管内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：大鼠肠微血管内皮细胞

英文名称： Rat Intestinal Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 全肠组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠肠微血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠肠微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 大鼠肠微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠肠微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 试剂：无菌 PBS、0.1%Ⅰ 型胶原酶、内皮细胞专用完全培养基（ECM+10% FBS + 内皮生长添加剂 + 双抗）、明胶（0.1%）包被液。

2. 耗材：培养瓶提前用 0.1% 明胶 37℃包被 30min，弃液晾干灭菌；解剖器械、滤网灭菌。

3. 设备：超净台紫外消毒，水浴 37℃预热。

二、取材与预处理

1. 成年 SD 大鼠麻醉处死，无菌取小肠组织，冰 PBS 冲洗肠腔内容物，剥离肠系膜细小血管网。

2. 剔除大块脂肪与结缔组织，仅保留肠系膜微血管组织，PBS 漂洗至无血色。

3. 将微血管剪切成糊状细小组织碎屑。

三、细胞分离与消化

1. 组织加入 Ⅰ 型胶原酶消化液，37℃摇床消化 45~60min，每隔 10min 吹打混匀。

2. 血清培养基终止消化，1200r/min 离心 5min 弃上清。

3. PBS 洗涤细胞沉淀 2 次。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过 200 目筛网，离心后内皮专用培养基重悬细胞。

2. 接种至明胶包被培养瓶，密度 1.5×10⁵个 /mL，37℃CO₂培养箱培养。

3. 24h 换液去除杂细胞与组织碎片，后续隔天换液；采用差速贴壁法纯化，成纤维细胞先贴壁，30min 后转移上清至新培养瓶获得纯内皮细胞

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.实验用药处理建议设置溶剂对照组，DMSO终浓度不超过0.1%以避免溶剂毒性。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。