产品名称 | 大鼠肠静脉内皮细胞 | 组织来源 | 肠静脉组织 |
英文名称 | Rat Intestinal Vein Endothelial Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2811 |
方法简介 实验室分离的大鼠肠静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠肠静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 大鼠肠静脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠肠静脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠β-胸腺肽(β-Thymosin )elisa试剂盒 | OKT11小鼠杂交瘤（抗CD2）细胞 |
大鼠β-神经生长因子(β-NGF)elisa试剂盒 | 人肾小管上皮细胞 |
大鼠β-乳球蛋白(β-LG)elisa试剂盒 | 人结肠上皮细胞 |
大鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)elisa试剂盒 | HEC-1-B (人子宫内膜腺癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠14-3-3蛋白eta(YWHAH)elisa试剂盒 | 非洲绿猴肾细胞CV-1（种属鉴定） |
大鼠15脱氧-前列腺素J2(15d-PGJ2)elisa试剂盒 | 小鼠小肠粘膜上皮细胞 |
猪阻抑素（PHB）elisa试剂盒 | 大鼠原代三叉神经元细胞 |
Walker/LLC-WRC 256大鼠腹水癌细胞专用培养基 | GPR161基因过表达细胞株 |
LNCaP clone FGC人前列腺癌细胞专用培养基 | FOXP4基因过表达细胞株 |
小鼠原代视网膜前体细胞专用培养基 | CDH15基因过表达细胞株 |
人原代扁桃体上皮细胞专用培养基 | BMT2基因过表达细胞株 |
人支气管平滑肌细胞永生化细胞专用培养基 | ASB6基因过表达细胞株 |
大鼠肠静脉内皮细胞pac2细胞专用培养基 | AMDHD2基因过表达细胞株 |
猪原代胸腺成纤维细胞专用培养基 | CCRL2基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
同肠动脉内皮细胞，仅取材目标更换为肠系膜静脉，其余试剂耗材一致。
二、取材与预处理
1. 腹腔暴露肠系膜，精细分离肠系膜静脉主干及分支，剔除外膜脂肪。
2. 肝素预冷 PBS 冲洗静脉管腔，排出血液。
3. 静脉血管剪为小段，冰 PBS 漂洗。
三、细胞分离与消化
1. 结扎血管两端，灌入胶原酶 II 溶液，37℃消化 30min。
2. 收集管腔洗脱细胞悬液，血清终止消化。
3. 过滤离心，收集细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 内皮专用培养基重悬接种包被培养瓶。
2. 差速贴壁纯化去除周细胞、平滑肌细胞。
3. 标准内皮细胞培养传代，形态铺路石状判定合格。
