产品名称 | 大鼠肠动脉内皮细胞 | 组织来源 | 肠动脉组织 |
英文名称 | Rat Intestinal Artery Endothelial Cells | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2807 |
方法简介 实验室分离的大鼠肠动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠肠动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 大鼠肠动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠肠动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠β-木糖苷酶(β-xylosidases)elisa试剂盒 | OP9小鼠骨髓基质细胞 |
大鼠β-分泌酶(β-Secretase)elisa试剂盒 | 人肝门静脉成纤维细胞 |
大鼠β微球蛋白(β-MG)elisa试剂盒 | 人结肠间质细胞 |
大鼠β-己糖胺酶(β-Hex)elisa试剂盒 | HEC-1-A (人子宫内膜腺癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠14-3-3蛋白(YWHAQ)elisa试剂盒 | 小鼠肾小球系膜细胞SV40-MES-13 （种属鉴定） |
大鼠15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)elisa试剂盒 | 兔口腔黏膜成纤维细胞 |
猪组胺（HIS）elisa试剂盒 | 人原代盲肠上皮细胞 |
UMR-106大鼠骨肉瘤细胞专用培养基 | APPL1基因过表达细胞株 |
LNCaP clone FGC人前列腺癌细胞专用培养基 | ARID3C基因过表达细胞株 |
小鼠原代肝内胆管上皮细胞专用培养基 | CHML基因过表达细胞株 |
人原代羊水干细胞专用培养基 | GABRR2基因过表达细胞株 |
人脂肪干细胞永生化细胞专用培养基 | SLC6A9基因过表达细胞株 |
大鼠肠动脉内皮细胞PA317细胞专用培养基 | BARD1基因过表达细胞株 |
小鼠原代脂肪细胞专用培养基 | GJA8基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 试剂：预冷 HBSS、0.1% 胶原酶 II、ECM 内皮细胞专用完全培养基、PBS、肝素钠。
2. 器械：显微血管镊、解剖剪、培养皿、离心管、150 目细胞筛。
3. 成年大鼠，器械无菌无酶，消化液现配。
二、取材与预处理
1. 处死大鼠开腹，分离肠系膜动脉分支，剥离外周脂肪与结缔组织。
2. 用预冷肝素 PBS 从血管一端灌洗管腔，冲净管腔内血液。
3. 剪取血管段置于冰上 PBS 中暂存。
三、细胞分离与消化
1. 血管两端结扎，管腔内灌注胶原酶 II 消化液，37℃孵育 25min。
2. 剪开血管，吹打管腔内壁洗脱内皮细胞，培养基中和消化。
3. 滤网过滤悬液，1200rpm 离心 8min 收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. ECM 培养基重悬，接种明胶包被培养瓶。
2. 差速贴壁去除平滑肌杂细胞，24h 首次换液。
3. 常规内皮细胞培养，2~3d 换液，细胞呈铺路石样即为纯化内皮细胞。
