大鼠表皮角化上皮细胞

大鼠表皮角化上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从Sprague-Dawley大鼠靶组织中分离表皮角化上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：大鼠表皮角化上皮细胞

英文名称： Rat Epidermal keratinized epithelial Cells

组织来源： 背腹部皮肤组织

默认种属 ：SD大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠表皮角化上皮细胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠表皮角化上皮细胞经K5免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠表皮角化上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠表皮角化上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 试剂：Dispase II、0.25% 胰酶、KSFM 无血清角质细胞专用培养基、PBS、双抗。

2. 器械：无菌手术刀、镊子、6 孔板、离心管、细胞筛。

3. 新生大鼠皮肤组织，超净台常规灭菌，培养基 37℃预热。

二、取材与预处理

1. 乳鼠处死消毒，剪取背部无破损皮肤，PBS 充分漂洗。

2. 剔除皮下脂肪层，将皮肤浸入 Dispase II，4℃孵育 12~16h。

3. 钝性分离表皮层，真皮层丢弃，表皮用 PBS 清洗两遍。

三、细胞分离与消化

1. 表皮剪碎，加入胰酶 37℃消化 10~12min，间断吹打。

2. 加入等量 KSFM 培养基终止消化，吹打混匀。

3. 200 目筛网过滤，滤液离心 1000rpm 5min 弃上清。

四、纯化与接种培养

1. KSFM 无血清培养基重悬细胞沉淀，去除成纤维细胞污染。

2. 调整细胞密度接种培养瓶，37℃5% CO₂培养。

3. 每 2 天更换新鲜专用培养基，细胞汇合 70%~80% 时胰酶常规传代。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。