产品名称 | 大鼠表皮黑色素细胞 | 组织来源 | 背腹部皮肤组织 |
英文名称 | Rat Epidermal Melanocytes | 种属 | SD大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3012 |
方法简介 实验室分离的大鼠表皮黑色素细胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠表皮黑色素细胞经S-100免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 大鼠表皮黑色素细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠表皮黑色素细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：SD大鼠，取目标组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、相应专用培养基组分
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷PBS冲洗去除血液和杂质
剪碎组织后采用胶原酶消化法(37度、1-2小时)分散细胞
过滤后300g离心8-10分钟收集细胞
根据细胞类型采用适当方法进一步纯化(密度梯度离心/免疫磁珠分选/差速贴壁)
原代培养要点
将纯化后的细胞接种于适当包被的培养皿中
使用含10%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，根据细胞生长特性调整培养条件
常见问题优化
细胞得率低：根据组织特性优化消化时间和酶浓度
细胞纯度不高：采用多种纯化方法联合使用提高纯度
细胞表型维持：控制传代次数，必要时采用特殊培养基或包被基质
大鼠磷酸化组蛋白3(γH2AX)elisa试剂盒 | NCTC1469（NCTC CLONE 1469）小鼠正常肝细胞 |
大鼠γ谷氨酰转移酶(γ-GGT)elisa试剂盒 | 人腹膜微血管内皮细胞 |
大鼠β-木糖苷酶(β-xylosidases)elisa试剂盒 | 人肛门上皮细胞 |
大鼠β-分泌酶(β-Secretase)elisa试剂盒 | HCC827 (人非小细胞肺癌细胞) (STR鉴定正确) |
大鼠11β前列腺素F2α(11β-PGF2α)elisa试剂盒 | 人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat，CloneE6-1 (STR鉴定正确) |
大鼠11β羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)elisa试剂盒 | 大鼠三叉神经元细胞 |
猪组织蛋白酶（Cath）elisa试剂盒 | 大鼠原代脾源性内皮祖细胞 |
RLE-6TN大鼠肺泡II型细胞专用培养基 | BLK基因过表达细胞株 |
Li-7人肝癌细胞专用培养基 | CCDC61基因过表达细胞株 |
人原代结肠癌细胞专用培养基 | BEND5基因过表达细胞株 |
兔原代输尿管上皮细胞专用培养基 | SELENOO基因过表达细胞株 |
上皮细胞专用培养基 | DIPK2B基因过表达细胞株 |
大鼠表皮黑色素细胞OVCAR-8细胞专用培养基 | DIPK2A基因过表达细胞株 |
小鼠原代尾尖成纤维细胞专用培养基 | ZNF175基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 试剂：Dispase II 分散酶、0.05% 胰酶、M254 黑色素细胞专用培养基、胎牛血清、PBS、庆大霉素。
2. 耗材：无菌刀片、培养皿、细胞筛、离心管，皮肤取材器械灭菌。
3. 选用 7~14 日龄大鼠腹部背部皮肤，提前配制分散酶 4℃避光备用。
二、取材与预处理
1. 大鼠麻醉处死，剃除腹背毛发，75% 酒精消毒皮肤，剪取整块表皮皮肤组织。
2. PBS 冲洗皮肤 3 次，去除污物血迹，修剪皮下脂肪与结缔组织。
3. 皮肤皮面朝外，浸泡于 Dispase II 溶液中，4℃静置过夜分离表皮与真皮。
三、细胞分离与消化
1. 次日撕取上层表皮组织，剪碎后加入胰酶 37℃消化 15min。
2. 血清终止消化，反复吹打制备单细胞悬液。
3. 100 目滤网过滤，离心 1000r/min 6min 弃上清。
四、纯化与接种培养
1. 专用培养基重悬细胞，接种培养瓶，差速贴壁 30min 去除角质细胞杂细胞。
2. 吸取未贴壁悬液转移至新包被培养瓶继续培养。
3. 37℃培养，每 2~3d 换液，待细胞长出树突即为黑色素细胞，可传代扩增。
