15-LO/LOX 大鼠15脂加氧酶ELISA试剂盒

15-LO/LOX 大鼠15脂加氧酶ELISA试剂盒

1、预包被板上固定有15-LO/LOX 大鼠15脂加氧酶特异性捕获抗体。

2、样本中的15-LO/LOX与包被抗体结合，再加入酶标检测抗体形成“包被抗体-抗原-酶标抗体”三明治复合物。

3、加入HRP底物液发生显色反应，颜色深浅与样本中15-LO/LOX含量成正比。

4、终止反应后在450nm波长下读取吸光度值，通过标准曲线即可精准计算样本中15-LO/LOX的浓度。

产品名称：15-LO/LOX 大鼠15脂加氧酶ELISA试剂盒

英文名称：15-LO/LOX ELISA Kit

产品货号：BKE7075

检测种属：大鼠

检测类型：双抗体夹心法测抗原

规格：96T/48T

存储条件：2-8℃避光密封保存

有效期：6个月

可测样本类型：血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等

1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟收集上清。

2、血浆：用EDTA或柠檬酸钠抗凝，混匀10-20分钟后2000-3000转/分离心20分钟取上清。

3、组织标本：称重后加pH7.4的PBS匀浆，液氮速冻后融化，2000-3000转/分离心20分钟取上清。

4、禁忌：?绝对不能检测含NaN3的样品?，NaN3会抑制HRP酶活性导致结果失效。

5、样本采集后24小时内完成检测，暂不检测可分装-20℃冻存，避免反复冻融。

操作步骤：

1、所有试剂提前从冰箱取出，平衡至室温后再使用，浓洗涤液盐析出时可37℃水浴助溶稀释。

2、设置标准品孔、待测样本孔，每孔分别加入梯度标准品或处理好的待测样本100μL，37℃孵育90分钟。

3、弃去孔内液体，不用洗涤，直接加入新鲜稀释的生物素化抗体工作液100μL，37℃孵育60分钟。

4、弃去液体后洗板3次，每次浸泡1-2分钟，拍干后加入酶结合物工作液100μL，37℃避光孵育30分钟。

5、弃去液体后洗板5次，每孔加入底物溶液90μL，37℃避光孵育10-20分钟，可见孔内出现蓝色梯度。

6、每孔快速加入终止液50μL，颜色由蓝立即转为黄色，15分钟内用酶标仪在450nm波长读取OD值。

一、全程避免样本溶血：红细胞破裂释放的内源性过氧化物酶，会直接干扰HRP标记抗体的酶促反应，引发非特异性显色，导致结果虚高。

二、绝对禁用含NaN?的样本：NaN?会不可逆抑制HRP酶活性，彻底阻断TMB显色反应，直接造成假阴性结果。

三、样本避免反复冻融：反复冻融导致蛋白降解、聚合，破坏抗原的天然构象，无法被包被抗体和检测抗体识别，定量结果大幅偏低。

四、不同批号试剂严禁混用：不同批次的捕获抗体、酶标抗体效价存在差异，混用会打破“三明治”免疫复合物的结合比例，直接破坏标准曲线的线性关系。

五、温育条件严格统一：所有反应孔的温育时间、温度必须完全一致，37℃环境下精准控制孵育时长，避免免疫结合效率不均，导致孔间结果偏差。