炭疽杆菌（BA）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

【产品名称】

通用名称：炭疽杆菌（BA）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

英文名称：Bacillus anthracis Detection kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】50 T/盒

【产品用途】

适用于皮肤水泡液、咽拭子、可疑食物等样品中炭疽芽孢杆菌核酸的快速检测。

【产品简介】

炭疽是由炭疽芽胞杆菌（Bacillus anthracis，BA）引起的一种人兽共患的急性、热性、败血性传染病。主要发生于畜间，以牛、羊、马等草食动物最为易感。人主要通过接触患炭疽的动物或污染的动物制品、环境感染而患病。

本试剂盒采用TaqMan 探针法进行实时荧光PCR检测，以炭疽芽胞杆菌毒素基因作为目标基因，探针5’端标记FAM荧光基团，3’端标记MGB淬灭基团，适用于包含疫苗样品等的炭疽芽孢杆菌的检测。反应液采用了抗体修饰的Taq DNA聚合酶，热启动机制可防止在样本准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体，提高了严谨性，更利于运输保存。配置UDG酶系统，防止扩增产物污染。添加抗PCR扩增抑制物因子，使本试剂盒更适用于复杂的动物临床样本的检测。考虑加样损失，本试剂盒提供55次反应的装量。

【产品内容】

【贮存及有效期】

-20℃以下避光贮存，有效期为 12 个月。

【注意事项】

荧光PCR方法具有极高的灵敏度，应用于临床检验必须采取严格的质控措施才能保证实验结果的准确性，在样本采集、核酸提取、扩增、产物分析整个流程都要做好质量控制。

1. 病毒病料操作前必须做好个人防护，接触病料的物品应合理处置，以免污染实验室和环境。

2. 实验操作应分区域进行（试剂准备区、样本制备区、扩增区），每一区域都须有专用的仪器设备。台面、地面可以使用 10%次氯酸钠清洁。

3. 本品使用保存过程应注意避光，尽量避免反复冻融。

4. 各试剂组分在使用前均需充分融化，上下颠倒混匀，请勿涡旋以免产生过多气泡，轻微离心后再开盖使用。

5. 本品检测灵敏度极高，空气中微量的核酸气溶胶可以引起污染，推荐使用专用的移液器，使用带滤芯的一次性吸头。使用过的枪头应打到含 10%次氯酸钠的废物缸中，检测结束后的PCR 反应管严禁开盖。

【操作步骤】

1. 样品采集处理（按照NY/T 561-2015的相关规定执行）

疑似炭疽患病动物病料标本采集

疑似炭疽患病动物，自消毒的耳部或尾根部静脉采血1mL~3mL，或者抽取病变部水肿液或渗出液以及天然孔流出的血性物，放置于无菌采样管中。

疑似炭疽死亡动物病料标本采集

天然孔出血的，直接吸取天然孔流出血液待检；天然孔未出血的，针刺鼻腔或尾根部静脉抽取血液。已经错剖的疑似炭疽动物尸体，应立即停止解剖活动，可抽取1ml.~3mL血液或血性物，或者用无菌棉拭子蘸取组织切面采样。

2. 核酸提取

使用适用于细菌基因组提取的试剂盒，阴性对照和阳性对照可以不经提取直接用于PCR扩增。

3. 反应液配制

1）从-20℃以下冰箱中取出试剂盒相应试剂，完全融化混匀后，快速离心数秒。

2）按照20 μL/管分装量将BA反应液分装至PCR反应管中。

4）样品核酸、阴性对照、阳性对照各5 μL加入对应反应管，盖好管盖。震荡混匀后快速离心数秒。

4. PCR扩增：

将PCR 反应管转移到荧光 PCR 仪上，记录放置顺序。

设置反应体系为25 μL，选择FAM通道检测BA核酸，淬灭基团为MGB，当使用ABI仪器时淬灭基团选择NFQ-MGB。反应程序如下：

【结果判定】

1. 质控标准

阳性对照：Ct 值≤30 并出现典型的 S 型扩增曲线；

阴性对照：无明显扩增曲线或无Ct值。

2. 结果判定：

阳性：被检样本出现特征性扩增曲线，且Ct值≤40。

阴性：无Ct值或无明显扩增曲线。

【参考标准】

NY/T 561-2015动物炭疽诊断技术

WS 283—2020 炭疽诊断

【生产企业】 武汉光启生物科技有限

公司地址：武汉市东湖新技术开发区高新大道666号光谷生物城B7栋A206       

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（本产品仅供兽医诊断使用）