活性氧检测试剂盒

产品简介

活性氧检测试剂盒本试剂盒基于 DCFH‑DA 荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平。DCFH‑DA 本身无荧光，自由透过细胞膜进入细胞，被酯酶水解生成 DCFH；细胞内 ROS 将 DCFH 氧化为带荧光的 DCF，通过荧光显微镜、流式细胞仪或者酶标仪检测荧光强度反映细胞内活性氧含量。适用于细胞氧化应激、药物氧化损伤等科研实验。仅限体外细胞科研使用，不可临床诊断。

试剂盒组分

1. DCFH‑DA 探针（DMSO 储存液）

2. 活性氧阳性对照试剂（可选）

3. 探针稀释液

储存条件

- DCFH‑DA：‑20℃避光密封保存，避免反复冻融，有效期 12 个月。

- 其余组分 2‑8℃避光保存。

- DCFH‑DA 建议分装保存，反复冻融易造成探针降解。

操作步骤

1. 细胞处理：细胞接种于培养板 / 培养皿，按照实验方案给药处理，设置空白对照组、阳性对照组。

2. DCFH‑DA 工作液配制：用无血清细胞培养基稀释 DCFH‑DA 至终工作浓度（常用 1‑10 μmol/L）。

3. 弃去细胞原有培养基，加入 DCFH‑DA 工作液，37℃细胞培养箱孵育 20‑30 min。

4. 孵育结束，吸除探针工作液，使用无血清培养基洗涤细胞 2‑3 次，充分去除未进入细胞内的探针。

5. 检测：

   - 流式细胞仪：收集细胞，488 nm 激发波长，525 nm 发射波长检测。

   - 荧光显微镜：直接观察细胞绿色荧光。

   - 酶标仪：裂解细胞后检测荧光读数。

注意事项

1. DCFH‑DA 对光敏感，全部孵育、操作过程尽量避光。

2. 探针不要用含血清培养基稀释，血清酯酶会提前水解探针造成背景升高。

3. 孵育时间不宜过长，过长会导致非特异性荧光升高。

4. 避免试剂反复冻融，探针母液建议小体积分装。

5. 本试剂盒仅用于体外细胞实验，不用于组织、体内动物定量诊断。

6. 荧光容易淬灭，染色完成尽快检测。

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