GV3101感受态细胞

产品简介

GV3101感受态细胞为农杆菌感受态细胞，属于根癌农杆菌，常用于植物基因转化、植物载体质粒转化，可用于 Ti 质粒介导的植物侵染实验。本品为化学法制备感受态，仅限体外科研实验使用，不可用于临床、人体相关用途。

技术参数

1. 菌株基因型：C58 背景，Rif 抗性，Ti 质粒去除，为农杆菌工程菌株

2. 转化效率：≥10⁴ cfu/μg 质粒 DNA

3. 抗性标记：利福平（Rifampicin）固有抗性

4. 形态：感受态细胞悬液，淡乳白色菌液

5. 无支原体污染，无杂菌污染

储存条件

- 感受态细胞：‑80℃保存，禁止‑20℃存放，避免反复冻融；有效期 6 个月

- 禁止放置液氮、4℃保存，温度升高会大幅降低转化效率

转化操作步骤

1. 取出感受态置于冰上融化，全程冰上操作；取 50‑100 μL 感受态加入 1‑10 ng 质粒 DNA，轻柔混匀，冰浴 30 min。

2. 液氮速冻 5 min 或者‑80℃放置 5 min；迅速置于 28℃水浴热激 5 min。

3. 加入 800 μL 无抗性 LB 液体培养基，28℃，200‑220 rpm 振荡复苏 2‑3 h。

4. 取适量菌液涂布于含利福平 + 载体对应筛选抗生素的 LB 固体平板。

5. 28℃倒置培养 48‑72 h，长出单菌落。

使用注意事项

1. 感受态融化后要尽快使用，反复冻融会直接造成转化效率断崖式下降。

2. GV3101 自带利福平抗性，筛选平板必须添加利福平，否则会生长大量杂菌。

3. 操作严格无菌，农杆菌属于生物工程菌，不要洒漏。

4. 质粒浓度不宜过高，过高容易产生假阳性。

5. 培养温度固定 28℃，不可 37℃培养，37℃农杆菌生长受抑制。

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