EHA101感受态细胞

产品简介

EHA101感受态细胞 为发根农杆菌衍生改造菌株，携带 Vir 辅助质粒，常用于植物遗传转化，可接受 Ti 衍生二元载体，适用于植物侵染、愈伤转化、载体构建验证等科研实验。仅科研体外使用，不可临床、人体应用。

技术参数

1. 菌株背景：农杆菌 EHA101

2. 基因型：C58 背景，携带 pEHA101 Vir 辅助质粒，卡那霉素抗性

3. 转化效率：≥10⁸ cfu/μg 质粒 DNA

4. 形态：甘油菌感受态，液态，‑80℃冻存

5. 抗性标记：卡那霉素抗性（菌株固有）

储存条件

- 严格‑80℃超低温冰箱避光保存，有效期 6 个月。

- 禁止‑20℃存放；禁止反复冻融，冻融一次后感受态效率显著下降。

转化操作步骤

1. 冰上融化感受态细胞，取 50‑100 μL 感受态置于无菌预冷离心管。

2. 加入 1‑5 μL 二元质粒 DNA，轻柔混匀，冰浴 30 min。

3. 液氮速冻 5 min，或者‑80℃放置 5 min；迅速放入 37‑39℃水浴热激 5 min。

4. 加入 800 μL 无抗生素 LB 液体培养基，28℃，180‑220 rpm 振荡复苏 2‑4 h。

5. 取适量菌液涂布于含对应筛选抗生素的 LB 固体平板，28℃倒置培养 2‑3 天，直至长出单菌落。

注意事项

1. 感受态融化后要尽快使用，放置室温会大幅降低转化效率。

2. 操作全部无菌，农杆菌为植物致病菌，实验操作做好生物防护。

3. 平板筛选需要包含菌株固有抗性（卡那霉素）以及载体携带抗性。

4. 复苏温度严格 28℃，温度过高会造成菌株活性下降。

5. 挑取单菌落之后建议 PCR 验证载体导入情况。

6. 废弃菌液需要高温高压灭菌后再排放。

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