PSH47载体

产品简介

PSH47载体为慢病毒 shRNA 干扰表达质粒载体，属于大肠杆菌扩增用重组 DNA 质粒。载体携带 shRNA 表达元件、筛选标记、慢病毒包装所需顺式作用元件，可构建靶向基因短发夹 RNA，用于哺乳动物细胞基因沉默、基因功能体外研究。仅限科研体外实验使用，不得用于临床、人体、基因治疗。

技术参数

1. 载体类型：慢病毒 shRNA 表达质粒

2. 宿主菌：大肠杆菌（推荐 DH5α、Stbl3，避免同源序列重组缺失）

3. 抗性：原核氨苄青霉素抗性；真核筛选标记：嘌呤霉素

4. 拷贝：高拷贝质粒

5. 性状：冻干质粒粉末 / 无菌水溶液（本说明书为干粉形式）

6. 测序引物：载体通用正向、反向测序引物用于插入片段验证

储存条件

- 干粉质粒：‑20℃密封干燥避光保存，有效期 24 个月

- 复溶质粒溶液：分装‑20℃保存，避免反复冻融；‑80℃可长期保存；4℃不超过 7 天

复溶与操作方法

1. 干粉质粒管简短离心，把粉末甩至管底；加入无菌 TE 缓冲液 (pH8.0) 或者无菌超纯水溶解，配制成 100‑500 ng/μL 储备液，轻柔吹打混匀，室温静置 5‑10 min。

2. 质粒转化：推荐感受态细胞 DH5α 或 Stbl3，Stbl3 更适合含有重复 shRNA 序列载体，减少重组缺失。

3. 扩增培养：LB 培养基，添加氨苄青霉素；37℃摇菌，不要过度长时间培养，防止质粒发生重组缺失。

4. 构建 shRNA：酶切‑连接或者同源重组方式插入 shRNA 寡核苷酸双链，测序验证插入序列完全正确方可用于后续包装。

使用注意事项

1. 含有病毒相关元件，属于生物二级风险核酸材料，严格按照实验室生物安全规范操作。

2. shRNA 重复序列容易发生同源重组，菌液不要长期 4℃存放，质粒提取后尽快分装冻存。

3. 不可直接转染动物体内，必须配合慢病毒包装质粒共转染包装细胞获得病毒上清后再感染靶细胞。

4. 所有产物仅限体外科研，禁止临床、基因治疗应用。

5. 质粒避免反复冻融，反复冻融造成质粒断裂，转染效率下降