SBFI AM 钠离子指示探针

产品简介

SBFI，英文全名 Sodium-binding Benzofuran Isophthalate，一种 Na+选择性荧光指示剂，可用来预测纯化线粒体 Na+梯度，检测细胞内 Na+水平，测定细胞 Na+外流，以及与其他荧光指示剂联合使用以分析 Na+与 Ca2+ 和 Mg2+浓度、胞内 pH 和膜电位变化的相关性。虽然 SBFI 对 Na+的选择能力弱于 Ca2+指示剂比如 Fura-2， 但在其他单价阳离子存在体系，SBFI 足以检测 Na+的生理浓度。结合离子后的 SBFI 光谱反应可通过激发 光比率测定来判定，其能与用相同光滤片和仪器检测的探针 Fura-2 共同使用。

当体系内含生理浓度的 K+ / Na+（~135mM），SBFI 对 Na+的解离常数（Kd）为 11.3mM；而不存在 K+体系， 对 Na+的 Kd 为 3.8mM。SBFI 对 Na+的选择性比 K+约强 18 倍。

本品为乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethyl ester, AM ester）形式的 SBFI，CAS NO：129423-53-6，具有细胞膜 渗透性，只需简单孵育即可进入细胞，常用加载浓度范围 5-10µM，加载时间 40min-4h，根据具体的实验要求和细胞类型来调整。

基本特性

CAS：129423-53-6

同义名：Sodium indicator SBFI-AM; Sodium-binding Benzofuran Isophthalate Acetoxymethyl ester;

化学名：4,4’-[1,4,10-trioxa-7,13-diazacyclopentadecane-7,13-diylbis(5benzenedicarboxylic acid 1,1’,3,3’-tetrakis[(acetyloxy)methyl] ester

分子式：C56H58N2O23

分子量：1127.07

纯度：＞90% (HPLC)

Ex/Em：340,380/500 nm

外观：浅黄至暗黄至暗橙固体

溶解性：溶于 DMSO（10mM）

储存条件：-20℃干燥保存，2年有效。

使用方法（以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。）

1）配置1-10mM SBFI AM 储存液：比如，实验前取一管50μg SBFI AM 置于室温回温至少20min，低速离心后，往管内加入8.8723ul 无水DMSO 使其充分溶解后，制备成5mM 储存液。若单次用不完，需分装冻存。

2） 准备25%（w/v）Pluronic F-127：100mg Pluronic F-127 粉末中加入400μl DMSO，配制成25%(w/ v) DMSO 母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。【也可配置成其他浓度Pluronic F-127，只需保证最终工作体系内Pluronic F-127< 0.1% (w/v)】。

3）于正式实验前，将SBFI AM 储存液于等体积25%（w/v）Pluronic F-127 混匀。【注意：SBFI AM 水溶性差，必须借助Pluronic F-127 来促进其分散进入水溶性加载缓冲液。两者只能在实验前混匀，不能保存待用】。

4）将上述混合液加入适量细胞加载缓冲液（如生理缓冲液PBS，无血清细胞培养基等）达到所需的工作浓度，加入细胞内进行探针标记。孵育温度可以是室温或37ºC，孵育浓度通常为5-10μM，时间40min-4h，具体的孵育浓度和时间请参考相关的文献资料。

5）孵育结束，再加入不含探针的细胞加载缓冲液额外孵育20-60min，以保证细胞将SBFIAM 完全酯酶化。

6）最后用生理缓冲液或无血清培养基清洗细胞至少一次，以降低胞外背景荧光。

7）用合适的仪器检测荧光信号，分别收集激发波长340nm，380nm，发射波长500nm（发射波长范围450-550nm，根据你的实际荧光信号看看最大波长吸收峰大概在哪个位置）。根据双激发波长收集荧光信号的比值来确定离子浓度。

8）如果细胞加载缓冲液是以碳酸氢钠为缓冲体系，那么加载需要含5% CO2 的环境内进行，以防止因CO2 损失引起的缓冲液碱化。

9）如果细胞加载缓冲液含血清，那需适当提高AM 探针工作浓度，以补偿因AM 探针与血清蛋白结合引起的损失。

10）某些情况下，对分子量接近或超过1000 的AM 探针，需用不含AM 探针的细胞加载缓冲液进一步孵育20-60min，以保证细胞内酯酶能充分降解AM 基团。

11）探针的加载时间和浓度因具体的细胞类型而有差异，请使用前参考相应的文献资料来设计和摸索最佳条件。

12）探针的细胞Kd 值与溶液Kd 值有差异，SBFI 的胞内Kd 值可用通道形成抗生素如gramicidin 来校准（calibration）。根据具体实验要求来决定是否做这一步。

注意事项

（1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

（2）SBFI AM易受潮，粉末需要干燥保存；需用无水DMSO溶解，配制储存液（如10mM），置于-20干燥 避光，小量分装避免反复冻融，至少3个月稳定。

（3）由于SBFI AM水溶性较差，可在实验前与等体积Pluronic F-127（25% w/v）混合，以提高探针加载效率。

（4）微量包装的产品定量精准，粉剂再进行分装会因为静电/产品性状等原因造成较大损失，再分装或重新称量前请斟酌！建议请直接在原包装瓶/管内按照所需加入适量的溶液配成浓储分装。

相关产品