土壤几丁质酶测试盒

商品属性：

商品介绍：

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

测定原理

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

自备实验用品及仪器

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板，甲苯、蒸馏水。
检测原理：

酶促水解原理：几丁质酶水解胶体几丁质底物的 β‑1,4‑N‑乙酰葡糖胺糖苷键，降解几丁质，释放 N‑乙酰‑D‑葡萄糖胺。

碳‑氮循环靶标原理：几丁质是真菌细胞壁主要组分；该酶活指示土壤真菌残体降解潜力。

显色检测原理：释放出的 N‑乙酰葡萄糖胺在碱性加热条件下与对二甲氨基苯甲醛显色，生成紫红色产物，585 nm 比色。

定量原理：N‑乙酰葡萄糖胺标准曲线定量产物；灭活土壤对照扣除本底，以单位土重单位时间产物生成量计算几丁质酶活性。
样本前处理方法：

动植物组织样本取样：按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

细胞/微生物样本收集：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照细菌或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

血清/血浆样本

血清(浆)样品：直接检测

食品/饲料样本提取：称取适量样本，加入提取液，振荡提取30min离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测

公司正在出售的产品：

测定操作步骤：

比色法/分光光度法操作仪器预热：分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到550nm，蒸馏水调零试剂配制：

试剂二：临用前加入10mL蒸馏水充分乳化备用

试剂三：临用前加入20mL蒸馏水充分溶解备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入试剂三100μL，摇匀，室温放置10min

记录550nm处的吸光值A空白和A测定标准曲线绘制：将油酸标准品稀释成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列浓度，同样处理，测定550nm处的吸光值，绘制标准曲线

荧光法操作仪器预热：荧光分光光度计/酶标仪预热30min以上，设置激发波长355nm，发射波长460nm试剂配制：

试剂二：临用前稀释至合适浓度备用样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

蒸馏水/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴10min，立即测定荧光强度F空白和F测定标准曲线绘制：将荧光标准品稀释成0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μmol/L系列浓度，同样处理，测定荧光强度，绘制标准曲线

ELISA法操作试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，室温平衡15-30分钟；将20×洗涤缓冲液用蒸馏水20倍稀释后备用加样：

从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃

设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）显色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min终止：每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值结果计算：绘制标准曲线，按曲线方程计算样本浓度