磷酸果糖激酶(PFK)/6磷酸果糖激酶/果糖6磷酸激酶测试盒

磷酸果糖激酶(PFK)/6磷酸果糖激酶/果糖6磷酸激酶测试盒

产品介绍：

PFK（EC 2.7.1.11)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，负责将果糖-6-磷酸和ATP转化为果糖-1,6二磷酸和ADP，是糖酵解过程的关键调节酶之一。

测定原理

PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PFK活性。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

检测原理：

核心反应原理：糖酵解限速酶偶联检测：PFK 催化果糖‑6‑磷酸 + ATP 生成果糖‑1,6‑二磷酸 (FDP)+ADP；后续经醛缩酶、甘油‑3‑磷酸脱氢酶偶联消耗 NADH。

靶标反应路径：F‑6‑P+ATP\(\xrightarrow{PFK}\)FDP+ADP；FDP 裂解产生磷酸二羟丙酮，磷酸二羟丙酮氧化消耗 NADH。

吸光信号来源：NADH 在 340 nm 吸收，反应中 NADH 不断消耗，吸光度下降速度代表 PFK 活性。

定量计算原理：测定 ΔA340/min，扣除本底空转速率；换算得到 PFK 酶活力。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

标准曲线绘制：

取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。

每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样本检测：

取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。

微量酶标仪法操作步骤

加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。

反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。

终止：每孔加入50μL终止液。

读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。