商品属性：
产品名称 | 山梨醇含量测试盒 | 货号 | YSH3392 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 检测方法 | 微量法、可见分光光度法 |
商品介绍：
山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是糖运输形式之一，而且与生物抗逆性和食物风味密切相关。因此，在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含量变化。
测定原理：
山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物，在655nm波长有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
检测原理：
反应原理：山梨醇脱氢酶专一催化山梨醇氧化成果糖，同时将辅酶 NAD⁺还原生成 NADH；340nm 检测 NADH 增量。
检测依据：340nm 吸光度增加值与样本中山梨醇含量成正比，朗伯‑比尔定律定量。
显色 / 信号机制：NAD⁺（无紫外吸收）被还原成 NADH（340nm 强紫外吸收）；吸光度升高代表山梨醇被氧化消耗。
计算原理：山梨醇标准品制作校准曲线；测定样本 ΔA340，代入曲线计算山梨醇含量，乘以稀释倍数。
样本前处理方法：
植物组织样本取样：称取0.1g样本，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆离心：11000g，4℃离心10min，弃沉淀取上清，置冰上待测
血清/血浆样本采集：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20°C，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻处理：直接检测。
细胞/微生物样本收集：先收集微生物或细胞到离心管内，离心后弃上清破碎：按照微生物或细胞数量（10⁴个）:提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万微生物或细胞加入1mL提取液），超声波破碎微生物或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）离心：8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测
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测定操作步骤：
标准曲线绘制：
取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。
每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。
加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。
立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
样本检测：
取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。
加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。
立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。
微量酶标仪法操作步骤
加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。
反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。
终止：每孔加入50μL终止液。
读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。
