内切β1，4葡聚糖酶(Cx)测试盒

商品属性：

商品介绍：

Cx存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，Cx主要作用于非晶态纤维素和水溶性纤维素衍生物，随机水解糖苷键，将其分解成葡萄糖、纤维二糖、纤维三糖和其他寡聚体。

测定原理：

采用3,5－二硝基水杨酸法测定Cx催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品：

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
检测原理：

反应原理：内切葡聚糖酶随机切割羧甲基纤维素钠 (CMC‑Na) β‑1,4‑糖苷键，释放短链还原糖；DNS 法测定还原糖生成量。

检测依据：540nm 显色吸光度与酶水解产生还原糖含量成正比；CMC‑Na 水溶性底物专门检测内切酶活性。

显色 / 信号机制：长链 CMC 多糖被内切酶打断，暴露出大量还原末端，还原糖在沸水浴下还原 DNS 产生棕红色。

计算原理：葡萄糖标准曲线定量产物；酶活：每分钟催化 CMC 生成 1μmol 葡萄糖定义为 1 U。
样本前处理方法：

‌一、组织样本‌

离体后立即液氮速冻，取0.1g新鲜组织按1:10比例加入预冷提取液。

冰浴条件下充分匀浆，超声破碎30次（功率20%，超声3s/间隔10s）。

8000g 4℃离心10min，取澄清上清置于冰上待测。

‌二、细胞/细菌样本‌

收集500万~1000万细胞，弃去培养基后加入1mL预冷提取液。

冰浴超声破碎，8000g 4℃离心10min，取上清待测。

三、液体样本‌

血清/血浆样本按1:10比例加入提取液，沸水浴振荡提取10min。

10000g常温离心10min，取上清冷却后待测。

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测定操作步骤：

操作仪器预热：将可见分光光度计预热30min，调节波长至540nm，用蒸馏水调零标准曲线绘制：

取6支具塞刻度试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准液（10mg/mL）

用蒸馏水补至1.0mL，再加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

立即用流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值

以葡萄糖浓度（mg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线样本测定：

试剂名称(μL) 空白管 测定管

提取液/样本 100 100

试剂一 700 700

试剂二 100 100

混匀后37℃水浴30min，立即加入2.0mL显色工作液，沸水浴5min

流水冷却至室温，定容至25mL，摇匀后测定540nm处吸光值A空白和A测定